淫羊藿总黄酮提取物树脂纯化工艺条件的优化.pdf

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1、江西化工2014年第1期淫羊藿总黄酮提取物树脂纯化工艺条件的优化周国保张文清2(1．江西省化学512业学校，江西南昌330012；2．华东理工大学化学与分子-r程学院，上海200237)摘要：以DI400大孔树脂、HZ一841大孔树脂、PA03060聚酰胺树脂，通过动态吸附与洗脱，对淫羊藿总黄酮提取物进行纯化，HZ一841大孔树脂的纯化效果最优。通过正交试验得到最佳纯化工艺条件为：2gHZ一841大孔树脂，上样总黄酮含量2mg／mL的提取液30mL，分别以80mL水、40mL20％乙醇、40mL85％乙醇

2、和20mL95％乙醇进行梯度洗脱，流速1．5mlMmin。最优条件下，利用HZ一841树脂纯化淫羊藿总黄酮提取液，得到干浸膏收率3．25％，其中总黄酮含量71．8％，淫羊藿苷含量9．44％。关键词：淫羊藿总黄酮提取物大孔树脂纯化1引言乙醇1O％。淫羊藿是一种全草类药材，其有效成分为淫羊藿各取2g处理过的树脂于锥形瓶中，分别加入药液总黄酮。淫羊藿总黄酮的提取主要有水提法和水醇提各43mL，恒温于10'E进行静态吸附。吸附初对吸附体取法，可配合高压、超声波、微波等辅助手段。根据文系中液相取样0．5mL分析总黄

3、酮的含量；每隔2h对吸献【I】，在微波辅助下醇提淫羊藿总黄酮，所得淫羊藿干附体系中液相取样0．5mL分析总黄酮的含量，共取样浸膏对淫羊藿原料的平均收率为10．7％，其中淫羊藿分析7次；5日后再取样0．5mL分析总黄酮的含量，继总黄酮含量29．7％。为了开发新药，淫羊藿提取物需续加入10mL药液。120h后取样0．5mL测定⋯总黄酮要进一步纯化，使淫羊藿总黄酮含量55％以上拉或的含量，再加入10mL药液，同上操作，重复2次。55％一65％J。为达到这一纯化要求，淫羊藿提取物2．3树脂纯化效果研究需经初步纯化

4、(不是必须的)和中度纯化步骤实现。在2．3．1树脂层析装置初步纯化中，有水提醇沉法——除去蛋白质、多糖等水采用内径‘p16×200mm的普通层析柱，柱中每次溶性杂质，醇提水沉法——除去树脂、蜡质、叶绿素等填充2g处理过的纯化用树脂，树脂层靠上、下塞入的醇溶性杂质，絮凝法——除去蛋白质、多糖、树脂、蜡质用乙醇浸泡过的棉团固定，柱中多余空间用‘P15的尼等杂质；根据文献J，用壳聚糖作絮凝剂在丹参口服液龙棒充填。通过蠕动式恒流泵以恒定流速进行上样或制备中获得较好纯化效果。在中度纯化中，通常采用洗脱。上样或洗脱的

5、流向均为自上而下。上样前用水大孔吸附树脂或聚酰胺树脂层析法。针对中度纯化步平衡。骤，以D1400、HZ841两种大孔树脂和聚酰胺吸附树脂2．3．2树脂层析操作为层析剂，阐述其对淫羊藿总黄酮提取物的纯化效果(1)上样药液：上样药液A由絮凝纯化液配制，总及取得最佳纯化效果的工艺条件。黄酮含量在1350．3ug／mL，含醇10％；另一种上样药液2实验方法B由提取液直接配制，总黄酮含量在1350．3ug／mL，含2．1树脂处理醇10％。D1400大孔树脂、PA03060聚酰胺树脂和HZ一841(2)上样方法：取3

6、0mL药液动态上样，流速0．大孔树脂各2g，倒入锥形瓶，各加10ml的80％乙醇浸5mlMmin，过柱液每5mL收集一次，共收集6次，分别各泡，静止存放过夜。浸泡液用水检测(1：1)，不浑浊表取0．5mL进行总黄酮测定，测定方法参考相关文献”。明乙醇洗涤充分。倒出浸泡液，倒入去离子水浸泡树(3)洗脱方法：先用60mL水洗脱，再用40mL20％脂，中途换一到两次水，直到无醇味为止。用水保存处乙醇洗脱、40mL70％乙醇(但PA03060聚酰胺树脂采理过的树脂(该树脂用于无醇吸附研究)，或用20％的用95％乙

7、醇)洗脱、10mL95％乙醇洗脱，洗脱流速恒乙醇溶液保存处理过的树脂(该树脂用于含醇吸附研定在1．5mlMmin。每梯度洗脱液单独收集，分别各取究)。0．5mL进行总黄酮的测定，测定方法参考相关文献。2．2三种树脂静态吸附研究2．3．3干浸膏制备方法药液为微波辅助下醇提液经絮凝初步纯化后加水收集到的第三梯度洗液、第四梯度洗液，分别制备或醇稀释的调整液，其中总黄酮含量为14oo~g／ml，含干浸膏方法：将第三梯度洗液或第四梯度洗液蒸馏2ol4年3月淫羊藿总黄酮提取物树脂纯化工艺条件的优化85浓缩，至5～10

8、mL后倒入表面皿，用少许(5—10mL)无(3)洗脱方法：依次用80mL水、20％乙醇(用量由水乙醇洗瓶壁，将该清洗液倒入表面皿，置表面皿于真正交设计决定)、第三梯度洗脱液(浓度、用量由正交设空干燥器中80℃干燥，对得到的纯化后干浸膏产品称计决定)、20mL95％乙醇洗脱，洗脱流速1．5mL／min。重。测定干浸膏产品中总黄酮含量⋯。2．4．3干浸膏制备方法2．4HZ一841树脂纯化工艺研究对第三梯度洗脱液和第四梯度洗脱液(第