用大孔树脂纯化柿叶总黄酮工艺考察

《用大孔树脂纯化柿叶总黄酮工艺考察》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第6卷第5期中国药剂学杂志Vol.6No.52008年9月ChineseJournalofPharmaceuticsSep.2008p.276文章编号：(2008)05–0276–07用大孔树脂纯化柿叶总黄酮工艺考察周文亮，孙蕴哲，唐星(沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳110016)摘要：目的筛选大孔树脂纯化柿叶总黄酮的最佳工艺，为后续研究提供基础。方法以大孔树脂对总黄酮的吸附率和解吸附率为指标筛选树脂种类；以吸附温度、供试液中总黄酮的质量浓度和供试液pH值为指标，考察不同条件下AB-8大孔树脂对柿叶总黄酮

2、的吸附量；以固体物中柿叶总黄酮的纯度为指标，确立洗脱用醇的体积分数及洗脱方法；采用紫外-可见分光光度法、HPLC法测定总-1黄酮的含量。结果选择AB-8大孔树脂；最佳纯化工艺为上样液总黄酮质量浓度60mg·L，pH5.0，温度25℃；最佳洗脱方式是用5倍柱体积的水及体积分数分别为10%、20%、30%的乙醇依次洗脱，弃去洗脱液后再用5倍柱体积的体积分数为50%的乙醇洗脱；HPLC法测定总黄酮的含量为76%。结论AB-8大孔树脂对柿叶总黄酮纯化的综合性能较好，适合于工业化大生产。关键词：药剂学；纯化；高效

3、液相色谱法；黄酮；AB-8大孔树脂；柿中图分类号：R94文献标志码：A柿叶为柿树科柿树属植物柿(DiospryroskakiL.f.)的新鲜或干燥叶，味苦，性寒，具有下气平喘、生津止渴、清热解毒等作用。其入药始见于明《滇南本草》记载“经霜叶敷臃疮”，《本草再新》记载用于“治咳嗽吐血，止咳生津”，主要用于止血、降压及治疗冠心病心绞痛、胃溃疡出血、肺结核[1]出血、功能性子宫出血等内脏出血病症。国内外对柿叶化学成分的研究已有很多报道,其主要有效[2]成分为黄酮类、三萜类、有机酸类、香豆素类、植物甾醇类、挥发

4、性成分等。有关柿叶总黄酮纯化工艺的研究并不多见。本研究中，作者以柿叶总黄酮的纯度为指标，通过正交设计考察大孔吸附树脂对柿叶总黄酮的静态、动态吸附性能，筛选大孔树脂纯化柿叶总黄酮的最佳工艺，为后续研究提供基础。1仪器与材料高效液相色谱仪（L-7100泵、L-7420紫外检测器、L-7200自动进样器、HSM色谱工作站，日本Hitachi公司），RE-3000旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），PHS-3C精密酸度计（上海理达仪器厂），HZQ-C空气浴振荡器（哈尔滨东明医疗仪器厂），UV-7504紫外可见分光

5、光度计（上海欣茂仪器有限公司），玻璃柱(25.0cm×1.5cm，沈阳药科大学自制)。D101、AB-8大孔树脂、聚酰氨大孔树脂（安徽蚌埠天星大孔树脂有限责任公司），体积分数为95％的乙醇（医用，沈阳莱博科贸有限公司），芦丁、槲皮素、山奈酚（中国药品生物制品检定所），柿叶黄酮粗提物（桂林三棱生物制品有限公司），其他试剂（分析纯，市售）。收稿日期：2008-03-20作者简介：周文亮(1981-),男（汉族）,安徽枞阳人,硕士研究生,E-mailliangdog813@126.com;唐星(1964-),

6、男（汉族）,陕西西安人,教授,主要从事缓控释制剂及中药制剂现代化研究,Tel.024-23986343,E-mailtangpharm@sina.com。第5期周文亮等：用大孔树脂纯化柿叶总黄酮工艺考察2772方法与结果2.1总黄酮含量测定方法的建立2.1.1紫外-可见分光光度法2.1.1.1标准溶液的制备与测定精密称取干燥至质量恒定的芦丁标准品约10mg，置50mL量瓶中，用体积分数为95%的乙醇溶解，并定容至刻度，分别精密移取该溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0置25mL量瓶中，加入

7、体积分数为5%的NaNO2溶液1.0mL，摇匀，放置6min后加入体积分数为10%的Al(NO3)3溶液1.0mL，摇匀，放置6min后加入体积分数为4%的NaOH溶液10mL，摇匀，用体积分数为95%的乙醇定容，静置15min后于波长510nm处测定吸光度。以芦丁质量浓度（ρ）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标进行回归，-1-3–1得标准曲线回归方程A=1.217×10ρ+6.9×10，r=0.9987，线性范围为14.5～57.7μg·L。2.1.1.2供试液的制备与含量测定精密移取柿叶黄酮样品液2.0

8、mL置25mL量瓶中，加入体积分数为5%的NaNO2溶液1.0mL，摇匀，放置6min后加入体积分数为10%的Al(NO3)3溶液1.0mL，摇匀，放置6min后加入体积分数为4%的NaOH溶液10mL，摇匀，用体积分数为95%的乙醇定容，静置15min后于波长510nm处测定吸光度。2.1.2HPLC法2.1.2.1色谱条件的选择色谱柱：HiQsilC18W柱（4.6mm×250mm，5μm）流动相：甲醇-体积分数为0.1%的磷酸溶液-1