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1、XX大学毕业论文脑出血大鼠心肌组织炎性因壬及热休克蛋白表达的变化及扶正护脑胶囊的干预作用姓名：2014年6月25日作用【摘要】H的观察脑出血大鼠心肌组织炎性因子及热休克蛋白表达的变化及扶正护脑胶囊的干预作用。方法动物随机分为假手术组、模型组、扶正护脑组和安宫牛黃组，分别于术后6、24、72h3个吋相点取材，采用免疫组织化学法检测肿瘤坏死因子-a(TNF-a)>热休克蛋白70(HSP70)的蛋白表达,通过图像分析，测定IOD值。结果模型组各吋间点TNF・a、HSP70的IOD值均显著升高，扶正护脑
2、组和安宫牛黄组均能明显降低TNF-a的IOD值，升高HSP70的IOD值。结论炎性因子参与了脑出血诱发心肌损伤的机制，扶正护脑胶囊通过抑制炎性因子表达、增强热休克蛋白表达而减轻心肌损伤。【关键词】肿瘤坏死因子・血热休克蛋白；扶正护脑胶囊；脑出血；动物模型Keywords:TNF-a；HSP70；FuzhengHunaocapsule；intracerebralhemorrhage；animalmodel研究发现，多种心血管疾病与炎症反应有关，肿瘤坏死因子-a(TNF-a)是极具代表性的促炎细胞因
3、子。脑出血后机体处于应激状态,自身内源性保护系统激活,热休克蛋白70(HSP70)作为一种细胞内源性保护蛋白，在防止应激引起的心肌细胞损害方面起着重要作用。本实验通过观察脑出血大鼠心肌组织TNF-a>HSP70表达水平的变化,探讨炎性因子在脑出血诱发心肌损伤屮的病理生理机制以及机体内源性的白我保护机制，并通过观察扶正护脑胶囊的干预效果，为脑心综合征的治疗提供一种新的思路。1实验材料1.1动物健康雄性Wistar大鼠，体重250〜300g,河南省医学科学院动物屮心提供。1.2主要仪器MetaMor
4、ph图像分析软件(美国UnivcralImagingCorporation)；普通光学显微镜(日本Olympus公司)；Spot-II型数码相机(美国Diagnostic公司)；石蜡切片机(德国Leitzwetzlar公司)。1.3主要药物与试剂即用型SABC免疫组化染色试剂盒、TNF・a、HSP70--抗均购自武汉博士德生物工程公司；PBS(0.01mol/L,pH7.2〜74)、枸椽酸盐缓冲液(0.01mol/L,pH6.0)、浓缩型DAB试剂盒和抗体稀释液均为北京屮杉金桥生物技术有限公司产
5、品。扶正护脑胶囊系北京小医药大学东直门医院重点实验室屮药化学组提供,0.50粒；安宫牛黄丸系北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产,3g/丸。2实验方法2」造模参照文献［1］方法，即选用胶原酶加肝索联合注射建立脑出血动物模型。大鼠术前8h禁食,不禁水，用0.3%戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉。将大鼠俯卧位I古I定于脑立休定位仪上。取头皮正屮切口，骨膜剥离器剥离骨膜,暴露前冈及冠状缝,取前冈为原点，向右3mm、向后1mm、深度5mm为注射点,即为右侧尾状核,用牙科钻钻孔，微量注射器注射含
6、胶原酶(1U/pL)和肝素(7U/pL)的生理盐水1gLo假手术组注射等量牛理盐水。注药后留针5min,退针缝合头皮。手术动物苏醒后，根据Bederson等［2］的评定方法，筛选造模成功的动物。2.2分组及给药72只动物随机分为假手术组（A组）、模型组（B组）、扶正护脑组（C组）和安宫牛黄组（D组），每组18只，分别于术后6、24、72h3个时相点取材，每个时相点6只动物。从术前11d开始灌胃，扶止护脑组剂量为1.35g/（kgd）,安宫牛黃组剂量为0.27g/（kgd）?假手术组和模型组分别予
7、等量的生理盐水。第12日造模，手术前后疗程2周。2.3标本采集及处理实验动物麻醉后剖腹，迅速摘取活体心脏，从心尖部开始依次取材，分别投入电镜固定液、4%屮性甲醛液，剩下的心室部分置于液氮屮保存待测。2.4心肌组织、肿瘤坏死因子和热休克蛋白70蛋白表达的测定采用SABC法,具体操作步骤严格按说明书操作。2.5染色结果判断及IOD值的测定TNF-a.HSP70免疫反应阳性物质为棕黄色颗粒。在显微镜图像采集系统下，每例切片随机选取4个1mm2而积的视野，根据着色强度和阳性表达而积的综合情况进行比较。采
8、用MetaMorph图像分析软件测定心肌组织阳性颗粒积分光密度（integratedopticaldensity,IOD）｛i□IOD为所测结构范围内阳性表达颗粒的总面积和平均吸光度值的乘积，它反映所测结构光密度与面积的综合变化。2.6统计学方法所有数据均以x±s表示，用SPSS12.0统计分析软件进行处理。组间比较采用方差分析，多元相关分析采用Pearson分析。3结果3.1各组不同吋间点肿瘤坏死因子・a积分光密度值比较（见表1）表1各组大鼠不同吋间点TNF-a积分光密度值比较（略）注：与B组
