[精品]配制固体培养基操作规程.doc

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1、配制固体培养基操作规程操作顺序操作内容操作要求1填写培养基成分单按所用培养基配方及其配制量，准确计算出备种成分母液及琼脂、蔗糖的用量，并按大、微、铁、有、调、琼、糖、pH的顺序，填写在“配制培养基成分单”上。2水锅加热在做培养基专用的不锈钢锅内，加进约为欲配培养基量的70-80%的蒸幅水或软化水（澄清后的凉开水），放在电炉上加热。3高压锅加水关闭高压锅排水阀，加软化水至安全水位线。4称取琼脂、蔗糖称取前，剪碎干胶条状琼脂，破碎蔗糖结块，须按1%以上的精度准确称量。5摆放培养瓶按预定分装瓶数，将洗净、晾（烘）干的培养瓶，在桌上摆放整齐。6量取和混溶母液把贮存各种所需母液的试剂瓶，按培养基成

2、分单所列顺序摆放整齐，再按配方用量顺序量取各成分母液，并混溶于烧杯屮。7加琼脂当水锅温度达9CTC左右时，加进称量好的琼脂，继续加热，不断匀速搅拌，严防糊锅。8加蔗糖待琼脂完全溶化后，撒入蔗糖，不停地搅拌。9加母液混溶液蔗糖溶化后，断电停止加热，边搅拌、边徐徐倒入母液混溶液。10加水定容加蒸憎水（或软化水）至标示欲配培养基量的锅壁记号。11调pH值用精密pH试纸，与比色卡比较:偏酸，滴入lmol/L的NaOH液;偏碱，滴入lmol/L的HC1液，少量多次进行调节，直至合乎要求为止。12分装培养基按不同组培目的所需的每瓶培养基用量，将培养基均匀分装于摆好的培养瓶内。然后在瓶M盖上消毒好的棉

3、塞或封口膜。13高压锅加热关闭进水口及放气阀，打开排气阀，通电加热。14培养基（瓶）封口棉塞上加盖牛皮纸（或直接用封口膜），并用棉线扎紧封口。15培养基（瓶）装锅瓶口向上，略向中心倾斜，瓶口不可贴于锅壁（防止冷凝水进入瓶内）。码放均匀，上方加盖三层牛皮纸吸湿，装锅不可过满，以加盖后不堵塞安全阀和放气阀的孔口为度。16高压锅封盖、开始灭菌封盖时应按顺时针顺序拧紧固定螺栓。在高压灭菌锅控制面板上选择温度121°C,时问为20分钟，按确认键开始灭菌。17培养基（瓶）出锅当灭菌结朿后，高压灭菌锅白动断电，打开锅盖，取出培养基（瓶）。18培养基（瓶）存放将出锅的培养基（瓶）整齐平放于接种室的存放架

4、上，并明确标示其培养对彖（种类、品种）、培养目的（诱导、继代、生根）或其它特定用途以及配制1」期。19高压锅排水打开排水阀，放尽锅内存水，以减少积垢。说明一、制定木操作规程的目的是：（1）防止发生差错，提高培养基质量；（2）使配制过稈井然有序，省时、省力、节省能源，提高T作效率。二、制定木操作规程所依据的条件是：（1）一人操作，一次配制8升培养基；（2）川2000W的电炉为水锅加热；（3）所用高压锅是“立式电热压力消毒器”（工作压力:137Kpa）,并配有3-6KV的稳压电源控制器，因此，当上述条件有变化时，就应对相关操作顺序和操作要求作必要的调整或变动。