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1、盐霉素高产菌的选育技术论文摘要：根据盐霉索生物合成途径对其产生菌进行了推理选育。在常规诱变基础上选用丁酸作为筛选剂检出所需耍的突变株，成功获得三株高产菌株3233#、3244#和3250#,其效价比出发菌株F21#分别提高了34%、44.9%和39%o主题词：盐霉素选育中图分类号:R978.1+3盐霉素(salinomycin)是由白色链霉菌(Streptoinycesalbus)发酵产生。口本早已证实盐霉索有很广的抗球虫谱，对鸡的柔嫩、毒害、堆型、脆弱、巨型和哈氏球虫均有效，50mg/kg就有明显抑制作用。此外，盐霉索对大多数革兰阳性菌有抑制作用，对梭菌等革兰阳性厌氧菌也有较
2、强的抑制作用。盐霉素以其高效、低残留、低耐药性在世界几十个国家获得许可使用。目前关于盐霉素的研究主要集中在其应用研究方血，对其菌种及工艺研究的报道较少。盐霉索为典型的含聚醯链(polyetherchain)结构的抗生素，通过乙酸和丙二酸的缩合进行生物合成［。盐霉素为构成聚瞇链的丙二酸被甲基和乙基高度取代的线性脂族分子，沿着分子链有一系列的四氢毗喃环和四氢咲喃环。研究表明，盐霉素生物合成过程和英他聚醯系抗生物质相同，即C2C4的脂肪酸直接进入盐霉素合成，为6mol乙酸、6mol丙酸和3inol丁酸缩合而成，其中丁酸为合成启动子。本文根据盐霉素分子结构和生物合成途径，运用推理选育理
3、论，通过选用丁酸R二CII3,甲基盐霉索；R二II,盐霉素作为筛选剂进行高产菌选育，为进一步工业化生产水平奠定基础。1材料与方法1.1出发菌株盐霉素产生菌F21#由浙江升华拜克生物股份有限公司科研中心提供。1.2培养基斜面培养基（g/L）甘油18,酵母浸粉2.3,氯化钠1・9,硝酸钠1.1,琼脂22；pH自然。摇瓶种子培养基（g/L）蔗糖9.7,玉米浆25,磷酸二氢钾2.0,豆油3.4,轻质碳酸钙1.1,酵母膏粉0.2；pH6.7~6.8o摇瓶发酵培养基（g/L）葡萄糖5.0,棉籽饼粉5.0,黄豆粉5.0,酒石酸鞍5.0,轻质碳酸钙5.0,氯化钾2.0,磷酸二氢钾0.1,硫酸镁
4、1.0,氯化钠0.1,豆油140；pH7.2O种子罐培养基（g/L）蔗糖15.0,棉籽饼粉8.0,黄豆粉7.0,酒石酸鞍5.0,轻质碳酸钙5.0,氯化钾2.0,磷酸二氢钾0.1,硫酸镁1.0,氯化钠0.3,豆油210；pH7.2o发酵培养基（g/L）葡萄糖25.0,棉籽饼粉15.0,黄豆粉15.0,酒石酸鞍5.0,轻质碳酸钙6.5,氯化钾2.0,磷酸二氢钾0.1,硫酸镂1.0,氯化钠0.3,豆油240；pH7.2o1.3实验方法（1）紫外线（UV）诱变刮取适量白色链霉菌的抱子于生理盐水中，振荡、打散抱子，经过滤制成单抱子悬液，取6〜8ml单抱子悬浮液放入灭菌的9cm培养皿内，紫
5、外灯下边搅拌边照射。紫外灯功率15W,照射时间分别为0、10、20、30和40s,照射距离为30cm。（2）甲基磺酸乙酯（EMS）诱变用pH7.2磷酸缓冲液制成抱子悬浮液，吸取8汩他子悬浮液放入带盖易密封小瓶中待用。用吸球及移液管吸取0・5ml的10mol/LEMS原液放入10mlpH7.2的磷酸缓冲液中制成0.5mol/LEMS溶液，再从0.5mol/LEMS溶液中吸取2ml放入盛放8m1抱子悬浮液带盖小瓶中，密封，置30°C培养箱中，每隔3min振荡1次。分别取不同时间的处理液，稀释，涂布双碟，计算死亡率、变异率（甲基磺酸乙酯的诱变效果与溶液质量有关，而甲基磺酸乙酯不稳定，
6、易发生水解作用而生成有毒而无诱变作用的化学物质，因此，其溶液需现配现用）。（3）筛选方法经紫外或EMS诱变处理后的抱子悬液经稀释后涂布于含一定浓度丁酸的平板中进行分离，再挑取单菌落制作小斜面，摇瓶培养验证效价。2结果与讨论2.1盐霉素产生菌选育系谱以F21#为出发菌株，经2轮紫外诱变加丁酸筛选得到221#菌株，221#再经EMS诱变和丁酸筛选得到3株高产菌株3233#、3244#和3250#。经此过程处理后筛选得到的突变菌株221#、3233#、3244#和3250#即可进行发酵产量试验。2.2紫外线与EMS对盐霉素菌株的诱变效应在采用丁酸作为筛选剂进行推理选育前，首先考察常规
7、诱变即紫外线EMS对菌株的效应。试验结果表明，盐霉素菌株经紫外照射时间20s后存活率在10%以下，照射40s致死率为97.5%oEMS单独处理盐霉索菌株18s致死率达98%o在同一剂量的情况下，EMS对盐霉素产生菌的诱变发生正变率大大高于负变率，但随着EMS剂量提高，盐霉素产生菌正变率也呈下降趋势，故本实验中EMS使用的剂量为l%o2.3丁酸作为盐霉素筛选剂的推理选育(1)UV诱变后丁酸筛选剂用量确定试验在分析盐霉索菌株代谢途径的基础上，以推理选育为基本理论，利用口然选育为对照，分别选取UV
