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《优化的蔗糖密度梯度离心法分离完整叶绿体》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、ISSN1002-4956实验技术与管理第27卷第7期2010年7月CN11-2034/TExperimentalTechnologyandManagementVol.27No.7Jul.2010优化的蔗糖密度梯度离心法分离完整叶绿体张年辉(四川大学生命科学学院,四川成都610064)摘要:建立了一种简单、低成本的分离完整叶绿体的方法。以家用食品料理机破碎植物细胞,采用两层不连续蔗糖梯度和使用较低的离心速度等措施降低了实验成本和对设备
2、的要求;通过采取措施防止叶绿体粗提物制备过程中叶绿体外被膜的破裂,以及在梯度制备和随后离心过程中由于颗粒扩散而导致的梯度不稳定,从而使方法具有很好的重复性。用该方法分离的完整叶绿体完整性很高(>90%),可以用于叶绿体细胞生物学、生物化学与分子生物学等多方面的研究。关键词:完整叶绿体;密度梯度离心;不连续蔗糖梯度;本科生实验中图分类号:Q2-33;Q942文献标志码:B文章编号:1002-4956(2010)07-0044-03Theoptimizedmethodofsucrosedens
3、itygradientcentrifugationtoisolateintactchloroplastsZhangNianhui(CollegeofLifeSciences,SichuanUniversity,Chengdu610064,China)Abstract:Asimpleandlow-costmethodforisolatingintactchloroplastswasestablished.Thecostsavingswereachievedbyhomogenizationplantm
4、aterialwithkitchenbender,usingtwo-stepsucrosegradientandlow-ercentrifugationvelocitythanthatinthepreviouslypublishedmethods;goodrepetitionswereachievedbyspe-cialmeasurestoavoidouterenvelopeofthechloroplastsbrokenduringtheprocessofcrudechloroplastsprep
5、a-rationandunstablegradientresultedfromtheparticlediffusionduringtheprocessofgradientpreparationandsubsequentcentrifugation.Chloroplastsisolatedbyusingthismethodwere>90%intactandcanbeusedtostudymanyaspectsofchloroplastsincludingcellbiology,biochemistr
6、yandmolecularbiology.Keywords:intactchloroplasts;densitygradientcentrifugation;discontinuoussucrosegradient;experimentofundergraduates制备完整叶绿体是进行叶绿体细胞生物学、生物目前已经有很多成熟的方法用于完整叶绿体的分化学与分子生物学研究的必要前提和基础。完整叶绿离。例如采用Percoll连续梯度或者Percoll不连续梯[1-2]体制备的一般过程是先破碎细胞,
7、用差速离心法得到度,以及不连续的蔗糖梯度。所有这些方法中,有去除细胞核的叶绿体粗提物,然后再将叶绿体粗提物的需要有特殊的仪器设备,例如用Percoll梯度分离经密度梯度离心以制备得到完整叶绿体。上述方法时,需要配有甩开转头(swing-outrotor)或垂直转头中,用密度梯度离心从叶绿体粗提物中分离完整叶绿(verticalrotor)的高速冷冻离心机,而且使用Percoll体是这一实验成败的关键。梯度的成本较高。有的实验操作复杂,例如采用不连续蔗糖梯度时,由于颗粒在不同梯度之间易于扩散,故收稿
8、日期:2009-08-25梯度的制备和维持比较困难,而且要使用转速高达25基金项目:教育部高等学校特色专业建设四川大学生物科学(教高[3]kr/min高速冷冻离心机。函[2008]21号);教育部国家级教团队四川大学国家生正是由于以上制约因素的存在,使得目前将密度物学人才培养基地专业课教学学团队(教高函[2008]19号);教育部国家生命科学与技术人才培养基地四川大学跨梯度离心技术应用于本科生实验还不多见。但离心技学科人才培养模式创新实验区(教高函[2009]4号
