何首乌有效成分二苯乙烯苷对aβ25-31诱导神经干细胞定向分化的影响

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1、中医杂志2014年2月第55卷第4期JournalofTraditionalChineseMedicine，2014，Vo1．55，No．4·323·DOI：10．13288／j．11-2166／r．2014．04．016实验研究何首乌有效成分二苯乙烯苷对AI325诱导神经干细胞定向分化的影响张玉莲，周震，韩文文，宋宛珊，黄建华，张琳琳。(1．天津中医药大学第二附属医院，天津市河北区真理道816号，300150；2．天津中医药大学；3．复旦大学附属华山医院)基金项目：国家重点基础研究发展计划(“973”计划)资助项目(2010C

2、B530405)[摘要]目的探讨何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对13一淀粉样肽(At3)诱导神经干细胞(NSCs)定向分化的影响。方法从孕14d昆明小鼠体外提取并培养NSCs，分别建立起两组分化系统可溶性At3体外诱导NSCs损伤的阿尔茨海默病(AD)细胞模型：神经元细胞分化模型M1(Ap25txmol／L)、星形胶质细胞分化模型M2(At35I~mol／L)。TSG低、中、高剂量组(TSG浓度分别为l0～、10～、10mol／L)分别干预模型M1和模型M2，采用WST．1细胞增殖及细胞毒性试剂盒检测各组NSCs细胞活性，采

3、用免疫荧光法及蛋白印迹法观察各组GFAP、Tubulin阳性细胞率及其蛋白表达情况。结果模型M1组和模型M2组细胞活性A值较相应的对照组明显降低(P<0．05)；TSG中、高剂量组A值明显高于相应的模型组(P<0．05)。与相应的对照组比较，模型M1组Tubulin阳性细胞率及其蛋白相对丰度值明显降低，模型M2组GFAP阳性细胞率及其蛋白相对丰度值明显升高(P<0．05)；与相应的模型组比较，TSG高剂量组Tubulin阳性细胞率及其蛋白相对丰度值均显著升高，GFAP阳性细胞率显著降低(P<0．05)。结论高剂量的TSG具有促进

4、Ap：吲诱导的NSCs向神经元方向分化的趋势，抑制向星形胶质细胞的分化。[关键词]何首乌；二苯乙烯苷；阿尔茨海默病；p一淀粉样肽；定向分化；神经元细胞；星形胶质细胞阿尔茨海默病(alzheimergdisease，AD)是临1材料床常见的中枢神经系统退行性疾病之一。研究1．1动物表明，B．淀粉样肽([3-amyloid，At3)沉积是ADSPF级孕14d昆明小鼠1只，由上海斯莱克实发病的中心环节j，神经元的丢失是神经退行性验动物有限责任公司提供，实验动物合格证号为病变的最终致病因素，因此，适当调控神经干SCXK(沪)2007—0

5、005。细胞(NSCs)的分化方向，以弥补神经元丢失，1．2药品和配制可能成为减缓AD的潜在治疗方法。二苯乙烯苷TSG(纯度>99％，批号：109010，购自上海(2，3，5，4一tetrahydroxystilbene一2一glycoside，TSG)友思生物技术有限公司)，单体溶于DMSO溶液，是中药何首乌中的主要水溶性成分，近年来发现，配制成10moL／L母液，用基础培养基稀释成所需TSG对神经具有保护作用_4J，前期研究从细胞增殖浓度。参照L6pez—ToledanoMA等方法将5mg方面亦发现，TSG对At3：诱导的N

6、SCs具有一定A[325(AnaSpac，批号：CA94555)溶于1888Ixl保护作用，本文拟以A13诱导NSCs建立分化的双蒸水中，震荡混匀，过滤，配制成浓度为系统的AD细胞模型，观察TSG对Ap诱导的2．5mmol／L的母液，用基础培养基分别将其稀释NSCs定向分化的影响，为临床应用TSG防治AD成终浓度为1~zmol／L、5Ixmol／L、25p~mol／L，提供实验依据。一20℃保存。1．3试剂通讯作者：zhy1220@126．COrn，(022)60335355细胞培养基KnockOutDMEM／F12(Gibco

7、公中医杂志2014年2月第55卷第4期JournalofTraditionalChineseMedicine，2014，Vo1．55，No．4司，批号：12660-012)、胎牛血清(FBS，Gibco形胶质细胞特异性标志物胶质纤维酸性蛋白公司，批号：10099—141)、表皮生长因子(EGF，(GFAP)、神经元细胞特异性标志物微管蛋白Gibco公司，批号：PHG0314)、成纤维细胞生长因(Tubulin)表达的变化，由此建立起两组分化系统子(bFGF，Gibco公司，批号：PHGO024)、Stem．可溶性A13：体外诱导

8、NSCs损伤的AD细胞模Pro(r)Neuralsupplement添加剂(Gibeo公司，批型_ⅢJ：神经元细胞分化模型M1(Ap25p~mol／号：A10508-01)、青-链霉素溶液(Biowest公司，L)；星形胶质细胞分化模型M2(A135i．zmol