非RGD肽-超微超顺磁氧化铁分子探针的制备及鉴定.pdf

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1、山东医药2013年第53卷第14期·基础研究·非RGD肽一超微超顺磁氧化铁分子探针的制备及鉴定王小东，吴国球，刘乃丰。(1江苏大学附属医院，南京212001；2东南大学附属中大医院临床医学实验中心；3东南大学附属中大医院心血管病研究所)摘要：目的制备及鉴定非RGD肽(命名为Plc)一超微超顺磁氧化铁(USPIO)分子探针。方法采用化学交联法将Plc偶联于二巯基丁二酸(DMSA)修饰的USPIO，形成具有免疫活性的Plc—USPIO分子探针。采用CCK一8试剂盒检测P1c—USPIO分子探针对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响，观察P1c—USPI

2、O的细胞毒性。用固相结合实验、普鲁士蓝染色和体外MRI法观察Plc—USPIO的体外免疫学特性。结果成功构建USPIO标记的P1c肽分子探针P1c—USPIO。其对HUVEC增殖无影响。固相结合试验及普鲁土蓝染色证实该探针能特异性与整合素ctv[33结合。体外MRI显示在同一USPIO浓度时，用Plc—USPIO孵育的HUVEC与用USPIO孵育者相比加权相信号强度明显降低(P均<0．01)。结论化学交联法可成功制备P1e肽超微超顺磁氧化铁分子探针，该分子探针具有良好免疫学活性，可特异性结合整合素c~v133分子。关键词：多肽；分子探针；整合素；内皮细

3、胞doi：10．3969／j．issn．1002—266X．2013．14．009中图分类号：R445．2文献标志码：A文章编号：1002—266X(2013)14-0024-04PreparationofmolecularprobemodifiedbynonRGDpeptideanditstargetingefectonhumanumbilicalveinendothelialcellsWANGXiao—aonWUGuo—qiu，LIUNai-reng(1AffiliatedHospitalofJiangsuUniversity，Nanjirig21

4、2000，P．R．China)Abstract：ObjectiveTodevelopanuhrasmallsuperparamagneticironoxide(USPIO)basedmolecularprobecontai—ningnonRGDpeptide(namedP1e)andinvestigateitstargetingeffectonhumanumbilicalveinendothelialcells(HU—VECs)．MethodsImmun0c0mpetentprobewasprepared，andduringthisprocessP1c

5、wasconjugatedwithUSPIOcoatedwithmeso-2and3-dimercaptosuccinicacid(DMSA)，andthecytotoxicityofP1c—USPIOwasobserved．Cellcountingkit一8assaywasconductedtoascertaintheprobe~effectontheHUVECsgrowth．TheUSPIOlabeledP1epeptidewastheexperi—mentalgroup，andtheUSPIOwasthecontrolgroup．Thesolid

6、phasebindingassayandPrussianbluestainingwereem—ployedtoevaluatetheimmunocompetenceofP1c—USPIO．TheprobecellMRimaginginvitrowasperformedusingHU—VECswithhighintegrinvB3expression．ResultsTheP1c—USPIOwasconstructed．TheprobehadnoeffectonthegrowthofHUVECs．ThesolidphasebindingassayandPr

7、ussianbluestainingshowedthattheprobecouldbindwithintegrinc~v[33onHUVECswithhighspecificity．MRcellimaginginvitrodemonstratedthatatthesameconcentrationtheT2val—HeinP1c—USPIOgroupwasmuchshorterthanthatinUSPIOgroup(whentheconcentrationofUSPIOwas0，10，20，40and80mLrespectively，theT2val

8、ueinP1c—USPIOgroupwas658．33±3．39，618．67±4．55，36