红花菜豆黄烷酮-3-羟化酶基因电子克隆及序列分析-论文.pdf

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1、现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2014，Vo1．30，No．4InSilicoCloningandSequenceAnalysisofF3HGeneinPhaseoluscoccineusMAGuang，GUOJi-ping(DepartmentofLifeSciences，HengshuiCollege，Hengshui053000，China)Abstract：Flavanone3-hydroxylaseisakeyenzymeinthebiosyntheticpat

2、hwayofplantflavonoids．TheputativecDNAsequenceofPhaseoluscoccineusF3HgenewasinsilicoclonedbyusingGlycinemaxF3HgenecDNAsequence(AAU06216．1)asaprobe．AccordingtotheputativecDNA，theprimersweredesignedforRT-PCR．ThecodingsequenceofF3HgeneinPhaseoluscoccineuscDNAwasc

3、lonedusingRT-PCR．ThenthesecondaryslructureandadvancedstructureofF3HinPhaseoluscoccineuswereanalyzedbybioinformaticsmethods．TheresultsshowedthatthecDNAcontainsanopenreadingframeof1128bp，whichencodedtheproteincontaining375aminoacids．TheproteincodedbyPhaseo／usco

4、ccineusF3HgenecDNAshowed92％similaritytoGlycinemax．Itssecondarystructurecontained40．8％a-helix．14．93％extendedstrand，39．73％randomcoiland4．53％f~-tum．Thehomologyanalysisofthree—dimensionalstructureshowedthatthethree-dimensionalstructureoftheproteinwasacompactglobu

5、larstructure．Keywords：flavanone3-hydroxylase；three—dimensionalstructure；sequenceanalysis；RT-PCR；bioinformaticsArticleNo．：1673·9078(2014)4—6-9红花菜豆黄烷]~-3-羟化酶基因电子克隆及序列分析马光，郭继平(衡水学院生命科学系，河北衡水053000)摘要：黄烷酮．3．羟化酶(F3H)是植物类黄酮物质生物合成途径中的一个关键酶。本文利用电子克隆的方法，采用已经报道的大豆F3H基因

6、cDNA序列为种子序列，搜索红花菜豆EST数据库，获得了假定的红花菜豆F3H基因cDNA的序列。根据假定的cDNA序列设计引物，采用RT-PCR的方法获得了红花菜豆F3H基因cDNA的编码序列。并采用生物信息工具对红花菜豆F3H的性质包括氨基酸序列组成、物理和化学性质、二级和三级结构的特点进行了研究。结果表明，红花莱豆F3H基因cDNA包含一个1128bp的完整的开放读码框，其编码蛋白由375个氨基酸组成。与大豆黄烷酮。3一羟化酶同源性为92％。其二级结构含有40．8％0【螺旋和39．73％无规则卷曲，B折叠较少

7、为4．53％。采用同源模建的方式分析其三维立体结构，表明其三维结构是一个紧密的球状结构。关键词：黄烷酮．3．羟化酶；三维结构；序列分析；RT-PCR；生物信息学Later，morecharacteristicsofF3Hgeneindiferent1Introductionspecieswerereported，suchasbarley，begonia，alfalfa，maize，thaleCressandperillat3JFlavanone3-hydroxylase(F3H；EC1．14．11．9)isa．H

8、owever,theexpressionkeyenzymeofflavonoidinplants．ItcatalyzescharacteristicsofF3Harediferentindiversespecies．Inhydroxyl~ionofC—ringthirdpositionhydroxylcatalyticpetuniaandsnapdragon，regula