海捕三疣梭子蟹-寄生性动基体目原生动物的初步研究-论文.pdf

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1、第35卷第3期海洋渔业Vo1．35，No．32013年08月MarineFLsheri~Aug．，2013文章编号：1004—2490(2013)03—0309—07海捕三疣梭子蟹一寄生性动基体目原生动物的初步研究施慧，谢建军，王庚申，许文军(浙江省海洋水产研究所，浙江海洋学院海洋与渔业研究所，浙江省海水增养殖重点实验室，舟山316100)摘要：从自然海区捕获的三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)上检测到一种寄生性原生动物，主要寄生于蟹血淋巴液中。通过普通光学显微镜检发现，病蟹的血淋巴细胞急剧减少，代之以大量的原生动物，此原生动物可以被中性红染液着色。运用PCR技术

2、对该原生动物进行了18SrDNA基因和ITS1—5．8SrDNA—ITS2基因序列扩增，同时对扩增片段进行了序列测定，应用软件MEGA3．1和DNAStar对测序结果进行了同源性比较和系统发育树构建。18SrDNA同源性比较结果显示：获得的18SrDNA序列与动基体目(Kinetoplastida)新波豆科(Neobodonidae)新波豆属(Neobodo)的同源性最高，达88．3％；获得的18SrDNA序列和GenBank中已登录新波豆属的其它原虫的18SrDNA序列在系统发育树中位于同一集群，初步确定该原生动物为新波豆虫(Neobodosp．)，是原生动物门(Protozoa)鞭毛虫

3、纲(Flagellata)动基体目新波豆虫科新波豆属的一员。关键词：鞭毛虫；动质体；新波豆属；血卵涡鞭虫；18SrDNA基因；ITS基因；系统发育分析中图分类号：Q959．11文献标识码：A三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)以下简似。病蟹表现为蟹体消瘦、反应迟钝；打开蟹盖，称梭子蟹是我国大型海水经济蟹类，由于经济价肌肉略呈白浊状、无弹性，梭子蟹的甲壳腔内体值高，人工养殖规模不断扩大。近年来，受海水液由正常时的蓝青色与具较强凝聚性转变为略养殖环境逐日恶化等因素的影响，梭子蟹病害频呈浑浊状不能凝固的变性液。本文对该寄生性繁发生，经济损失严重。梭子蟹自人工育苗至养原虫开

4、展了形态学特征、核糖体DNA基因序列成商品蟹出池的各个时期均有病害发生。养殖及其遗传发育系统等的初步研究，旨在对梭子蟹梭子蟹的主要病原目前报道的有溶藻弧菌(Vibrio寄生性原虫的有效检测及深入研究等提供一定alginolyticus)、假丝酵母菌(Cnadidaoleophila)、的参考，同时也为探索自然海区梭子蟹病原携带恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)、副溶血弧菌情况提供一定理论基础。(VibrioParahaemolyticus)、对虾白斑综合症病毒1材料与方法(WhiteSpotSyndromeVirus，WSSV)以及血卵涡鞭虫(Hematodinium)-6

5、]，但针对自然海区梭子1．1患病梭子蟹来源蟹病害研究报道较少。2007年笔者从自然海区实验用蟹为2007年5月至6月期间在舟山捕获的梭子蟹上检测到了一种寄生性原虫，该原渔场自然海区捕获的梭子蟹活体，重量在40～60虫在形态学上与近年报道的血卵涡鞭虫比较相g，共50ind，其中雌蟹15ind，雄蟹35ind。将收收稿日期：20l3—05—13基金项目：浙江省科技厅项目(2011F30017，2012F30022)；浙海渔计(2011127，2012116)；舟山市科技计划项目(2012C23003)作者简介施慧(1978一)，女，江苏启东人，副高职称，主要从事海水养殖病害的研究。Tel：05

6、80—3053386，E—mail：huishi2002@126．COB通讯作者：许文军，教授级高工。E-mail：xwe~un@sina．con310海洋渔业2013庄集到的样品低温保存运至实验室备用。查聚类树各分支置信度，N．J法构建分子系统树，1．2实验方法确定其种类。1．2．1显微检查2结果用1mL注射器先吸取10％海水配制的福尔马林固定液100，然后分别从健康蟹和疑似患2．1原虫显微检测病的梭子蟹围心腔内抽取等量血淋巴液，轻轻振通过对制作的血涂片油镜下观察，收集到的荡使其充分混匀，将固定好的血淋巴液滴少许于50ind海捕蟹中共发现了2ind血淋巴液中有原载玻片上，盖上盖玻片，于显

7、微镜下直接观察；抽生动物的病蟹，均为雄蟹。正常梭子蟹的血淋巴取100ILL病蟹血淋巴液，按中性红染色试剂盒说涂片中，只观察到无颗粒细胞、小颗粒细胞和颗明书进行染色，然后在显微镜下观察；抽取100粒细胞3种血淋巴细胞，未见有寄生性原生动L病蟹血淋巴液，与等量1．5％生理盐水混匀直物。接压片镜检。在病蟹血淋巴涂片镜检时观察到，蟹的正常1．2．218SrDNA序列PCR扩增血淋巴细胞数量急剧减少，代之以大量具有运动取95％酒精