交配与未交配三疣梭子蟹肝胰腺蛋白质组学的初步分析-论文.pdf

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1、第26卷第4期，2013年1oYJ宁波大学学报(理工版)首届中国高校优秀科技期刊奖Vo1．26No．4，Oct．2013JOURNALOFNINGBOUNIVERSITY(NSEE)浙江省优秀科技期刊一等奖交配与未交配三疣梭子蟹肝胰腺蛋白质组学的初步分析徐洲，母昌考，李荣华，宋微微，王春琳(宁波大学海洋学院，浙江宁波315211)摘要：采用双向电泳和基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI—TOF／TOF)~究三疣梭子蟹交配与未交配雌性个体肝胰腺蛋白质表达．使用PDQuest软件分析双向电泳凝胶图像，结果显示：交配组和未交配组凝胶图像上分别能检测到(400士25)和(530-4-16)个

2、蛋白点，其中共有15个蛋白点表达量有显著性差异(尸<0．05)．与未交配组相比，交配组三疣梭子蟹肝胰腺中6个蛋白点的表达量显著性上升．经质谱鉴定为：磷酸丙糖异构酶、磷酸丙酮酸水合酶、过氧化氢酶、6一谷胱甘肽S一转移酶、ATP合酶Ⅱ亚基和胰凝乳蛋白酶．此外，交配组三疣梭子蟹肝胰腺中9个蛋白点的表达量显著性下降．经质谱鉴定为：延伸因子2、长链酰基CoA脱氢酶、假血蓝蛋白1、假血蓝蛋白2、异柠檬酸脱氢酶、线粒体乙醛脱氢酶x、转酮醇酶、血蓝蛋白a一亚基和腺苷高半胱氨酸酶A．该结果可为揭示三疣梭子蟹卵巢发育机理提供重要参考．关键词：三疣梭子蟹；蛋白质组学；交配；肝胰腺中图分类号：Q513文献标志码：A

3、文章编号：1001．5132(2013)04—0001．06三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)，隶属于蛋白质和脂肪含量变化会发生规律性变化．虽然甲壳纲、十足目、梭子蟹科，广泛分布于中国，日以往学者对三疣梭子蟹肝胰腺蛋白质含量在卵巢本和韩国沿海地区，是我国重要的海产经济蟹类，发育过程中的变化趋势已有报道，但研究方法大在全球海水养殖业也占据了极其重要的地位【iJ．众多是对肝胰腺进行组织切片和生化成分测定，而所周知，肝胰腺是甲壳动物的重要器官，在甲壳类没有蛋白表达水平研究的报道．笔者旨在探究三动物生长、免疫反应和代谢等多种生理过程中发挥疣梭子蟹卵巢发育过程中，交配和未交配

4、三疣梭着重要作用【2]．其中，肝胰腺某些蛋白质功能会影子蟹肝胰腺中蛋白质表达差异情况，并对产生差响卵巢的发育．例如，普通滨蟹(Carcinusmaenas)异的原因进行分析．对交配与未交配雌性三疣梭维甲酸x受体会刺激卵巢的发育，而中华绒螯蟹子蟹肝胰腺开展差异蛋白质组学研究有助于深入(Eriocheirsinesis)硒蛋白M在个体快速发育期参与了解肝胰腺的功能．生殖调控L3J．但关于肝胰腺蛋白质在雌性三疣梭子1材料与方法蟹卵巢发育中表达量变化和所发挥主要功能的文献还未见报道．1．1三疣梭子蟹交配及样品采集有学者指出三疣梭子蟹生殖蜕壳后没有交配三疣梭子蟹饲养于浙江宁波鑫亿鲜活水产有的个体卵巢会

5、停止发育，因为交配是诱导滤泡细限公司，随机挑选健康成年雄性和雌性三疣梭子胞向卵母细胞迁移和卵黄发生的前提【4]．吴旭干等[5】蟹各30只，每只体重约为180g．雄性和雌性分别指出某些三疣梭子蟹卵巢发育过程中，肝胰腺中饲养于塑料饲养筐内(40cmx40cmx40era)．于收稿日期：2013一O325．宁波大学学报(理工版)网址：http：／／joumallg．nbu．edu．cn／基金项目：国家自然科学基金(41106123)；浙江省农业新品种选育重大专项(2012C12907—3)；浙江省海水养殖重点科技创新团队项目(2010R50025—08)；宁波市海洋与渔业专项(2011．1-7)；

6、浙江省教育厅科研项目(Z201121258)；宁波市农业科技专项(201015)宁波市海洋蟹类产业科技创新团队项目(2011B81003)．第一作者：徐洲(】989一)，男，江西九江人，在读硕士研究生，主要研究方向：遗传育种与种质保护．E-mail：xuzhou9559国163．tom通信作者：王春琳(1965一)，男，浙江台州人，博导傲授，主要研究方向：水产养殖．E—mail：wangchunlin@nbu．educn2宁波大学学报(理工版)2011年9月将雌蟹和雄蟹各30只以l：l的数量比白质点．例放入同一饲养筐内，共3O对．使用塑料栅栏将1．4酶解和质谱鉴定其中15对雌蟹和雄蟹分隔开，

7、阻止其抱对和交配，将切取的每个蛋白质点单独放入O．5mL离心视为未交配组．交配组雌蟹和雄蟹不做上述处理．管中，加超纯水漂洗2次．加入300考染脱色液观察发现，交配组雌蟹生殖蜕壳后，雌雄蟹能抱对(25mmol’L～NH4HCO3，5o％L腈的水溶液)，脱色并交尾，交尾结束后可观察到纳精囊中精荚呈桃30min．吸出脱色液，加入200100％~腈溶液，红色，并随着雌蟹甲壳硬化，精荚逐渐缩小并褪脱水30min．吸出脱