三疣梭子蟹对寄生性病原—血卵涡鞭虫免疫响应的初步研究.pdf

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1、PrimarystudyontheimmuneresponsesofPortunustrituberculatusagainsttheHematodiniumparasiteByMengLiADissertation/ThesisSubmittedtoTheUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequirementForthedegreeofDoctorofScienceInstituteofOceanology,ChineseAcademyofSciencesMay,2016致谢本研究论文是在我的

2、导师李才文研究员的悉心指导下完成的。在攻读博士学位的这三年时间里，李老师不仅在科研工作中对我进行悉心指导和帮助，帮助我解决在实验工作中遇到的难题。同时，还在人生道路上给我指明方向，教导我如何规划自己的人生道路和设定自己的人生目标；教导我要踏踏实实做事，不好高骛远也不要妄自菲薄，一步一个脚印地向着规划设定的人生目标奋斗、前进。在这三年里，李老师还教会我如何认真做好事情以及许多处世做人的道理。李老师的辛勤付出使我在工作和生活中都获得了长足的成长和进步。在此，我谨向我的导师李老师致以我最真诚的谢意和最崇高的敬意，同时道一声，老师，您辛苦了！衷心感谢课题组里的其他成员宋书群老师、刘云老师、王

3、金凤师妹、陈田田师妹、李照师妹以及田达玮师弟等在我的学习工作和生活中给予的关心和帮助！本论文的顺利完成与他们的参与和帮助是密不可分的，与课题组里大家的团结互助是密不可分的。与你们一同奋斗的日子是快乐的、幸福的，在此，送上对他们最诚挚的感谢！衷心感谢生态室的于仁成研究员、宋秀贤研究员以及开放室的崔朝霞研究员在我的博士研究生开题时所给予的宝贵建议和帮助！衷心感谢研究生部的各位老师在学习工作和生活中给予的指导和帮助！衷心感谢论文评阅和答辩委员会的所有专家老师，感谢你们在我的论文评阅和答辩过程中给予的宝贵建议！衷心感谢我亲爱的家人、朋友以及同学们对我生活上的关心和工作上的支持！衷心感谢我的女

4、朋友刘琰对我生活上的关心照顾和工作上的全力支持，感谢她对我的理解和包容！最后，向所有曾经在生活和工作中帮助、支持、关心过我的老师、同学、亲人和朋友们致以我最衷心的感谢！本研究得到“国家自然科学基金青年基金项目（No.41206145）、国家自然科学基金创新群体项目基金（No.41121064）、基金委-山东省联合基金海洋生态与环境科学项目（No.U1406403）、战略先导专项（No.XDA11020302）、中科院百人计划项目”的资助支持，谨此表示感谢！三疣梭子蟹对寄生性病原-血卵涡鞭虫免疫响应的初步研究摘要三疣梭子蟹是我国重要的海产养殖经济蟹类。近年来，三疣梭子蟹养殖受到寄生性甲

5、藻类病原-血卵涡鞭虫引发的流行病害“牛奶病”的严重危害，其可持续发展受到严重威胁。寄生性甲藻类病原-血卵涡鞭虫在世界范围内可寄生感染多种重要经济甲壳动物，其发生范围及感染宿主种类有逐渐扩大的趋势，不仅影响了重要经济甲壳动物的野生群体及其渔业产业，也开始危害重要经济甲壳动物养殖业的可持续发展。目前，针对该寄生性甲藻-血卵涡鞭虫的相关研究大多集中于物种鉴定、检测技术、流行病学等方面，尚缺乏病原宿主相互作用等基础研究工作。因此，本论文从宿主免疫响应的角度出发，系统研究了甲壳宿主-三疣梭子蟹与寄生性甲藻类病原-血卵涡鞭虫的相互作用过程，以期进一步丰富和完善甲壳动物免疫机制的基础理论，同时为寄

6、生性甲藻类病原引发的养殖病害的防控提供理论依据。主要研究结果如下：1．克隆获得三疣梭子蟹Toll基因的全长cDNA序列，全长为3745bp，开方阅读框为3012bp，编码1003个氨基酸，其编码氨基酸序列与拟穴青蟹和锯缘青蟹中的Toll序列相似性高达88%，并在系统发育树中优先与甲壳动物Tolls序列聚为一枝。Toll基因在三疣梭子蟹体内广泛表达且在血细胞中的表达丰度最高。在血卵涡鞭虫的侵染早期（侵染24h内），Toll基因的转录表达水平在三疣梭子蟹的血细胞、鳃、心脏和肌肉组织中受到显著性抑制，反映出该寄生性病原可能对其甲壳宿主体内的Toll免疫信号传导途径具有一定的抑制作用，而该抑

7、制过程也可能与该寄生性甲藻类病原在甲壳宿主体内的存活及寄生过程密切相关。之后，Toll基因的转录表达水平在受到侵染48h时的血细胞和心脏组织以及受到侵染48h和96h时的肝胰腺组织中显著上调，可能反映了甲壳动物Toll基因在相应时间阶段对血卵涡鞭虫的免疫防御作用。最后，经血卵涡鞭虫侵染192h时，Toll基因在血细胞、肝胰腺和肌肉组织中的mRNA表达量显著下调，可能表明该寄生性病原在侵染后期已逐步破坏其宿主体内Toll受体介导的免疫信号途径的免疫防御功能。