豆渣固体发酵生产灵芝菌丝粉条件优化及三萜化合物含量的测定-论文.pdf

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1、第16卷第3期黄山学院学报Vo1．16，NO．32014年6月JournalofHuangshanUniversityJun．2014豆渣固体发酵生产灵芝菌丝粉条件优化及三萜化合物含量的测定王世强，李雨桐，唐巧巧(黄山学院生命与环境科学学院，安徽黄山245041)摘要：利用豆渣代料固体发酵灵芝菌丝粉．结果表明茵丝生长势与菌丝培养温度、培养料／糖比密切相关，培养温度在28℃，料，糖比为100：2，茵丝生长势最强；以单位重量茵丝粉含三萜化合物量为目标函数，利用豆渣培养基培养灵芝茵丝体的最佳条件则为料，糖比为100：2；培养温度为24℃；培养时间为茵丝满瓶后12d。每g菌

2、丝粉三萜化合物含量可达2．44mg。灵芝茵丝特有三萜化合物含量可间接反映茵丝粉中纯菌丝含量及灵芝多糖的含量。关键词：灵芝茵丝粉；三萜化合物；固体发酵；液体发酵；豆渣中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1672-447X(2014)03-0059-04灵芝俗称芝草、仙草、瑞草。在分类学上属于真菌担子菌门、层菌纲、非褶菌目、灵芝科、灵芝属【一。1．材料与方法灵芝富含多糖、蛋白质、多肽类、三萜类化合物(灵芝酸)、有机锗、甾体皂甙及多种微量元素，是著名1．1材料与仪器的药用菌。灵芝多糖、三萜类化合物是灵芝的主要豆渣葡萄糖培养基：豆渣为黄山市农贸市场活性物质【3．41

3、，是灵芝发挥扶正固本、提高自身免疫购买：能力，促使机体器官机能正常化功效的物质基础。韩芝(休宁食用菌研究所)；据研究，灵芝菌丝体中的粗多糖含量明显高于灵芝齐墩果酸(上海金穗生物科技有限公司)。子实体及孢子粉中多糖的含量。其菌丝体中粗多糖齐墩果酸标准对照品溶液：精确称取105％干含量是老化期子实体中粗多糖含量的6倍，是灵芝燥至恒重的齐墩果酸对照品O．0046g于10ml容量孢子粉中粗多糖含量的2．8倍嘲。瓶中，用乙酸乙酯定容；一般非谷物性培养料固体法培养灵芝菌丝，不香草醛(天津市光复精细化工研究所)，香草醛具有可食性；采用谷物性培养料固体法培养灵芝菌溶液：5g香草醛用

4、100ml冰醋酸进行溶解；硫酸溶丝，由于多糖测定方法相同，培养料淀粉多糖与菌液(VⅣ)：取水28ml，加硫酸至100ml。丝多糖难以分离测定，效果难以确定；人们一直以MJ一160B—II型恒温恒湿培养箱(上海跃进医疗来采用液态发酵生产获得灵芝纯菌丝体，但液态发器械厂)：酵生产菌丝体设备昂贵、生产技术要求高，菌丝产YX280A型高压蒸汽灭菌器(上海三申医疗器量低。本研究旨在通过灵芝菌丝所含特征化合物一械有限公司)：三萜化合物测定，以解决培养物中灵芝菌丝含量的FA2104一B型电子天平(上海越平科学仪器有测定方法，探讨豆渣代料固体法生产可食性、灵芝限公司)；菌丝粉的可能

5、性，为富含灵芝多糖、三萜类化合物pH一300型酸度计(上海天达仪器有限公司)；灵芝菌丝粉大规模生产及应用提供参考。SW—CJ—IC型超净工作台(苏州安泰空气技术收稿日期：2014-02-28作者简介：王世强(1955一)，安徽歙县人，黄山学院生命与环境科学学院副教授，研究方向为微生物学、食用茵学。·6()·黄山学院学报2014丘公司)：丝生长温度为6—35℃，菌丝发满容器后5—10d即721分光光度计(上海天普分析仪器有限公司)：可现菇蕾(菌丝老化)的固体法灵芝菌丝体的营养DHG一9123A型电热恒温鼓风干燥箱(上海三发育条件”，选用料糖比、培养温度、菌丝满瓶后发科

6、学仪器有限公司)；再培养时间作为豆渣固体法灵芝菌丝体培养的考THZ一82B型气浴恒温振动器(江苏金坛医疗仪察因素，取其各自不同的水平进行正交实验，以单器厂)：位重量菌丝粉三萜化合物含量作为评价指标，实验HH—s4数显电热恒温水浴锅(金坛岸头仪都仪设计见表1器厂)：表1灵芝培养基及培养条件的因素水平表冰箱。1．2实验方法1．2．1灵芝菌丝粉生产工艺流程固体发酵法：斜面菌种一原种一接种一培养一灵芝菌丝培养物一60烘干一粉碎一过筛一样品灵芝菌丝粉；液体发酵法：斜面菌种一接种入100ml马铃薯蔗糖液体培养基一26℃，140—150rpm摇瓶培养14d一过滤取菌丝一60℃烘干

7、一研磨一纯灵芝菌2结果与分析丝粉，。1．2．2显色方法罔2．1不同处理豆渣培养基上灵芝菌丝生长势状况实验采用的显色方案为5％香草醛一冰醋酸样品中灵芝菌丝三萜化合物含量与灵芝菌丝0．5ml，72％硫酸5ml，65℃恒温水浴加热20min，冰水生长状况密切相关，在菌丝培养的中期通过放大镜中静置5min后测定。观察菌丝生长状况，通过瓶壁菌丝10d菌丝蔓延伸1．2．3齐墩果酸标准曲线[91长值的测定，除以l0换算菌丝培养中期日伸长值：分别精密量取齐墩果酸标准溶液0．0ml(空白)、每瓶装干豆渣80g，使其含水量达65％左右，通过培0．1ml、0．4ml、0．8ml、1．