灵芝菌丝体多糖的免疫活性指纹图谱及其发酵优化.pdf

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1、分类号密级硕士学位论文题目：灵芝菌丝体多糖的免疫活性指纹图谱及其发酵优化英文并列题目：StudyonChromatographicFingerprintofPolysaccharidesfromG.lucidumMyceliaBaesdonImmunocompetenceandOptimizationofItsFermentation研究生：王海燕专业：食品科学与工程研究方向：食品资源开发和利用导师：戴军指导小组成员：陈尚卫朱松学位授予日期：2015年6月答辩委员会主席：张晓鸣教授江南大学地址：无锡市蠡湖大道1800号二○一五年五月独创性声明本人声明所呈交

2、的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得江南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。签名：LJkA日期：年/月5"日关于论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规定:江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印

3、、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。曰期：年/功厂曰摘要摘要灵芝历史悠久，远在春秋时期既被视为祥瑞的征兆，有“瑞芝”之称。到了汉朝时期，便有书籍记载灵芝的药学用途，其中叙述最详细的当属《神农本草经》，书中记载灵芝可“久食轻身不老，延年神仙”。近年来，学者们对灵芝进行系统、科学地研究，灵芝多糖作为灵芝生物活性的主要物质基础，俨然已成为研究热点。关于灵芝多糖的研究主要包括多糖的分离纯化、结构分析、生物活性、药效机理以及灵芝多糖产品的质量监测等方面。本课题构建了灵芝菌丝体多糖

4、的HPLC指纹图谱，考察了灵芝菌丝体多糖及其多糖级分的HPLC指纹图谱和免疫活性的谱效关系，初步探究了灵芝液体深层发酵对其指纹图谱正相关峰的影响，为灵芝菌丝体多糖的质量监测和灵芝菌种的发酵优化提供依据。以浙江、山东、安徽、江西和江苏等地区11个厂家的液体深层发酵灵芝菌丝体粉为原料，选择较为温和的水浴法提取多糖。脱色、脱蛋白后，11种灵芝菌丝体多糖的纯度介于77%～86%。单糖组成分析显示11种多糖样品的单糖组成种类和摩尔比各异，13但均含有Man、Rha、Glc、Gal、Xyl、Ara、Fuc和少量糖醛酸。IR和CNMR结果表明，4号样品（包括菌丝体多糖和

5、发酵液多糖）的异头碳构型为β型。灵芝菌丝体多糖的分子量分布范围较广，从几千到百万不等。建立了灵芝菌丝体多糖的部分酸水解耦合PMP柱前衍生化RP-HPLC标准指纹图谱，得到17个共有特征峰，其中有8个单糖峰，共有峰的面积和占总面积的98.7%以上。10种菌丝体提取的多糖样品的指纹图谱与其标准指纹图谱的相似度均＞0.953，4号样品的相似度为0.874。比较了灵芝菌丝体多糖、子实体多糖和孢子粉多糖的RP-HPLC标准指纹图谱，菌丝体多糖和孢子粉多糖的相似度为0.590，而菌丝体多糖和子实体多糖的相似度为0.968，可见通过该方法可以区分灵芝菌丝体多糖和孢子粉多

6、糖，无法区分灵芝菌丝体多糖和子实体多糖。灵芝菌丝体多糖分子量分布中，区间50kDa～100kDa、100kDa～500kDa、50033kDa～1×10kDa和＞1×10kDa与多糖促进小鼠脾细胞增殖率呈正相关，多糖的免疫33活性主要取决于500kDa～1×10kDa和＞1×10kDa两个大分子量区间。RP-HPLC指纹图谱中，寡糖峰峰2、峰3、峰5、峰6和峰9以及单糖峰Xyl、Rha、Gal、Ara、Fuc均为促进小鼠脾细胞增殖的正相关峰。4号多糖样品分离纯化后，得到2个中性多糖GLMNP1和GLMNP2以及3个酸性3多糖GLMAP1、GLMAP2和GL

7、MAP3。HPSEC检测其分子量分别为6.61×10kDa、314.1kDa、5.01×10kDa、94.3kDa和9.79kDa，纯度分别为94.13%、91.79%、93.15%、91.50%和92.55%。单糖分析显示，5个多糖级分主要含Man、GlcN、Rha、Glc、Gal、Ara、Xyl和Fuc，但它们的单糖摩尔比各异。多糖级分的分子量分布与其免疫活性的相关性分析表明，大分子量区间50kDa～100kDa和100kDa～500kDa与多糖免疫活性呈正相关。多糖级分的RP-HPLC指纹图谱中有16个特征峰，寡糖峰峰2、峰6和峰7以及单糖峰GlcN

8、、Ara、Xyl、Rha和FucⅠ摘要为正相关峰。多糖和多糖级分的