灵芝活性多糖的提取工艺研究

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1、灵芝活性多糖的提取工艺研究【摘要】目的确立水提醇沉法与超声提取法相结合提取灵芝活性多糖的最佳工艺。方法以脾细胞代谢MTT活力为评价指标，采用正交试验对超声时间、水提温度和水提时间等因素进行考察，寻求最佳的提取工艺。结果各因素对灵芝多糖脾细胞代谢MTT活力的影响大小排列为:超声时间>水提温度>水提时间,超声时间对灵芝多糖活性影响显著。提取最佳工艺为：超声提取时间20min，水提取温度80℃，水提取时间2h。结论本工艺为提取活性灵芝多糖提供了一定的参考。【关键词】灵芝多糖;脾细胞;提取工艺;正交试验Abstract:Objective

2、Toexploreanoptimumextractionprocedure(ethod)ofactivepolysaccharidesfromGanodermalucidum.MethodsByusingcolorimetricmethylthiazolyltetrazolium(MTT)assayofspleniccellsofmiceasevaluationindicator,orthogonalteste,perature,andetoexploretheoptimalextractionprocedure.ResultsThemain

3、influencingfactorsofcolorimetricmethylthiazolyltetrazolium(MTT)assayofspleniccellsofmicee，perature，andeinturn.Theoptimalconditionsoforthogonalexperiment：ultrasonicextractionfor20minutes,ehadsignificanteffectonextractionofactivepolysaccharidesfromGanodermalucidum.ConclusionT

4、hetechnologyprovidedreferencesforextractionofactivepolysaccharidesfromGanodermalucidum.　　Keyalucidumpolysaccharides;spleniccells;extractionprocedure;orthogonalexperiments　灵芝是我国传统的补益中药，现代研究表明灵芝多糖是其主要活性成分之一，灵芝多糖具有抗肿瘤及免疫调节作用[1，2]。灵芝多糖提取方法有传统的水提醇沉法[3，4]、超声波法[4-6]、酶法，还有冷冻预处理法、超声

5、波催化纤维素酶法、超临界萃取法等。灵芝多糖的活性在不同的提取工艺中变化很大，提取率高并不意味其有效活性高。现有文献对灵芝多糖提取工艺的研究未与其活性联系起来。本文拟采用水提醇沉法和超声波法相结合提取灵芝活性多糖，应用正交试验法设计试验，探讨提取工艺中影响因素对多糖活性的影响，采用小鼠脾细胞增殖实验检测多糖的免疫活性，确立优化的提取工艺。　　1实验材料　　1.1动物　　SPF级近交系BALB/c小鼠，雌雄兼用，8～10周龄，体质量(20±2)g，由南方医科大学实验动物中心提供，证号：SCXK(粤)20060015。　　1.2材料　　灵芝(产地

6、：广西，批号：20080101，广州市药材公司中药饮片厂)。　　1.3仪器　　LIBRORAEG220G型电子天平(SHIMADZUCorporation);超声仪(广州华南超声设备厂);恒温水浴器(汕头市医用设备厂有限公司);RE52A型旋转蒸发仪(上海雅荣生化设备仪器有限公司);D12SA型鼓风干燥箱(上海浦东荣丰科学仪器有限公司);DOAP133AB8型抽滤减压泵(GastManufacturing,Inc.);ST21型高速冷冻离心机(美国杜邦公司);Universal16A型低速离心机(Hettich公司);Benchm

7、arkPlusTM型连续波长酶标仪(BioRAD公司);5410型CO2培养箱(Thermo公司)。　　1.4试剂　　95%乙醇(广东广宁县葡萄糖药业有限公司，批号：20071101);葡萄糖、硫酸等试剂均为分析纯;重蒸苯酚(南方医科大学化学教研室);RPMI1640培养基(GIBCO公司产品);噻唑兰(MTT)、ConA(刀豆蛋白A)均为Sigma公司产品。　　2方法　　2.1正交试验设计　　根据文献报道，超声提取时间(因素A)、水提取温度(因素B)、水提取时间(因素C)对灵芝多糖的提取影响较大，最佳的提取条件在一定范围之内，超声时间为2

8、0～40min，提取时间为1.5～3h，提取温度为80～100℃[6-8]。根据预实验及文献，本文正交试验对上述三因素，每个因素设三水平进行考察，以脾细胞代谢MTT