导入nodD-lba串联基因的根瘤菌工程菌株的构建-论文.pdf

《导入nodD-lba串联基因的根瘤菌工程菌株的构建-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、生物技术通报·研究报告·BloTECHNoLoGYBULLETIN2013：~第8期导入nodD—lba串联基因的根瘤茵工程菌株的构建李珊珊李海英于冰(黑龙江大学生命科学学院黑龙江省普通高等学校分子生物学重点实验室，哈尔滨150080)摘要：旨在利用同源序列克隆法，克隆出结瘤相关基因nodD和大豆血红蛋白基因lba。以串联的方式将nodD和lba基因连接到lac启动子的下游，通过DNA重组技术构建出带有发光酶基因luxAB的重组载体pTR．Pl．nodD．1ba。通过三亲本杂交方法构建转基因费氏中华根瘤茵(

2、Sinorhizobium)，Westernblot试验证明导入基因能够进行表达。将初始菌株和基因工程茵株侵染大豆幼苗后进行固氮酶活的测定。测定结果表明，转基因工程菌株均能够提高固氮酶效率，导入串联基因的工程茵株在提高固氮酶活性上比导入lba和nodD基因的工程茵株高出4％和15．1％。关键词：结瘤基因nodD大豆血红蛋白基因Iba费氏中华根瘤茵三亲本杂交TheConstructionofRhizobiaEngineeringStrainofIntroductionaTandemGenenodD—lbain

3、toSinorhizobiumfrediiLiShanshanLiHaiyingYuBing(KeyLaboratoryofMolecularBiology，CollegeofLifeSciences，HeilongjiangUniversity，Harbin150080)Abstract：Inthisstudy，homology—basedcloningwasusedtOclonehemoglobingeneoflbaaridnodulationgeneofnodD．Thetwogeneswereorde

4、redjoinedintodownstreamoflacpromoterandconnectedbytheDNArecombinanttechniquetoconstructedexpressionvectorpTR-Pl-nodD-lbamarkedbyluxABgene．ThevectorwastransformedintoSinorhizobiumfrediiwiththemethodoftriparentalhybridizationtoconstructgeneticengineeringstra

5、in．WesternblotindicatedthegenesweusedCanexpressnormally．Strainswereinoculatedsoybeanseedlingsinordertogetnitrogenaseactivity．Theresultshowedengineeringstrainscanimprovethenitrogenaseactivityandtheengineeringstrainwithtandemgenescanenhancenitrogenaseactivit

6、y4％and15．1％，respectively，bycontrastwithengineeringstrainwithlbaornodDgene．Keywords：NodulationgenenodDGlycinc，nleghemoglobingenelbaSinorhizobiumfiediiTriparentalhybridization大豆可以与土壤固氮细菌一根瘤菌建立共生关投身于研究如何提高固氮效率和怎样维持根瘤的固系，根瘤菌的固氮作用能够使植物在缺乏氮的土壤氮作用J。生物圈中的总氮量在减少，豆科

7、植物的条件下生长⋯。在豆科植物中，固氮过程是植物和固氮作用可以缓解这一情况，并在可持续生产系统根瘤菌发生复杂相互作用的一个结果，这个过程类中发挥至关重要的作用J。似所有的合成途径能够提高植物新陈代新过程中消在固氮过程中，大豆血红蛋白能够调节类菌体耗的能量，但是此过程所消耗的碳量较高J。由于的氧浓度，还可以保护并维持固氮酶的活性。大豆基因方法和管理方法的进步，大豆的产量在之前的中铁的缺乏会导致豆血红蛋白的含量降低。大豆30年中有了稳定的增加。为了提高产量，大豆植株血红蛋白由一类在根瘤中特异表达的隐性基因编码，

8、必须维持高光合作用率并在种子中积累大量的氮元包括lba、lbcl、lbc2和lbc3四个主要基因J。本实素。而生物固氮可以作为提供氮元素的主要来源使验室的前期研究中发现，转入lba基因的根瘤菌工大豆高产J。包括南非在内的一些国家现阶段都在程菌株与原始菌株和导入空载体的对照菌株以及导收稿日期：2013．03．12基金项目：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目(Rc20o9xK001Oo4)，黑龙江省科技攻关项目(G