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《【毕业设计-医学论文】慢性阻塞性肺疾病tnfa和lta基因等位基因变异浅析.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、慢性阻塞性肺疾病TNFA和LTA基因等位基因变异浅析【摘要】研究屮国北方汉族人群屮TNF超家族基因等位基因变异是否与慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关联。方法以50例COPD患者为研究对象，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法研究TNF超家族基因(TNFA和LTA)等位基因变异分布。结果C0PD组TNFA基因多态性位点-308G/AAA基因型频率明显高于对照组(P【关键词】慢性阻塞性肺疾病TNFA基因LTA基因遗传多态性Abstract:ObjectiveToinvestigatewhetherTNF-gen
2、eallelevariationisassociatedwithchronicobstructivepulmonarydisease(COPD)ofHanpopulationinnorthernChina.Methods50casesofCOPDwereselectedassubjectsforTNF-superfamily-gene(TNFAandLTA)allelevariationdistributionbythemethodofpolymerasechainreaction-restrictionfragmentlcngth
3、polymorphism(PCR-RFLP).ResultsComparedwiththecontrolgroup,①COPDgrouphadahigherfrequencyofAA-genotypeatTNF-genepolymorphismspacepoint-308G/A(PKeywords:chronicobstructivepulmonarydisease;TNFAgene;LTAgene;geneticpolymorphism慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepulmonarydisease,COPD
4、)是内科系统常见病、多发病，慢性炎症是COPD发病过稈中的重要特征。参与肺部炎症调节的细胞因了在COPD发病过稈屮起重要作用。肿瘤坏死因了-a(tumornecrosisfactor-a,TNF-a)是一个多功能的细胞因了，它促进气道重构，改变平滑肌细胞功能，参与肺部炎症调节，从而在COPD发病过稈屮起重要作用。淋巴毒索-a(lymphotoxin,LT-a)也是炎症细胞介索，主要由淋巴细胞合成。2种细胞因了都与细胞表面的相同受体有关系。编码这2种细胞因了的TNFA和LTA基因彼此连锁并位于6号染色体短臂(6p21.1-6p21.3
5、)主要组织相容性父合体簇范用内。关于TNFA和LTA基因不同等位基因变异影响TXF-a和LT-a表达水平问题始终意见不一。已证明与G等位基因比较，A等位基因与细胞因子产物成倍的增高有关［1-2］。在亚洲某些群体发现TNFA基因的A等位基因与某些呼吸系统疾病表型关联，而在欧洲群体迄今未得到证实。LTA基因第一内含了+252A/G多态性对肺部疾病的作用研究很少。本研究的目的是探讨TNFA和LTA基因等位基因变异与COPD的相关性。1资料和方法1.1研究对象和分组所有COPD患者均为屮国北方汉族人,COPD组选取2004年12月一2006
6、年2刀在我院呼吸科住院的COPD患者50例，诊断符合COPD诊治指南［3］,年龄58〜83岁，平均(62.41±13,38)岁。对照组选取我院同期健康体检者50例，年龄56〜79岁，平均年龄(58.92±12.53)岁,X线胸片和肺功能正常。同时均排除支气管哮喘、肺癌、肺间质纤维化等呼吸系疾病及冠心病、高血压等具有遗传倾向的疾病。1.2方法1.2.1基因组DNA的提取用标准苯酚-氯仿法从外周血抽提基因组DNAo1.2.2PCRTNFA基因-308G/A和LTA基因+252A/G的检测用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RF
7、LP)方法。各位点引物序列、PCR片段大小及酶切反应条件见表1。PCR反应体系为25ul,包括4ul模板基因组DNA,10XPCR缓冲液2.5ul,Mg2+浓度2.0mmol/L,1mmol/LdNTPs2.5Pl,引物各5pmol,TaqDNA聚合酶4U（北京鼎国生物技术有限责任公司），不足体积用灭菌双蒸催水补充至25uloTNFA基因-308G/APCR反应循坏参数:94°C预变性5min；94°C变性60s,61°C（LTA基因+252A/G为64°C）退火45s,72°C延伸60s,32个循环；最后72°C延伸7min。扩增
8、后取反应产物4u1在2%琼脂糖凝胶上电泳15min（电压120V）,紫外线灯下鉴定PCR产物。表1引物序列与PCR、酶切反应条件1.2.3酶切条件及体系采用限制性片段长度多态性（RFLP）检测TNFA和LTA基因的多态性（表1）。在2
