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1、安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2007,35(9):2555-2557责任编辑罗芸责任校对李洪美国红鱼和大黄鱼β-珠蛋白基因的克隆和遗传进化分析11211褚武英,张平,钱荣华,印遇龙,黄瑞林(1.中国科学院亚热带农业生态研究所,湖南长沙410125;2.浙江大学生物医学与仪器工程学院,浙江杭州310027)摘要根据已发表的其他脊椎动物β-珠蛋白基因序列设计并合成1对特异性引物,通过RT-PCR方法首次克隆到美国红鱼和大黄鱼β-珠蛋白cDNA,其开放读码框均由447个碱
2、基组成,编码148个氨基酸的多肽,预测的相对分子量分别为16333和16148Da,两者核苷酸序列和推导的氨基酸序列同源性分别为90.4%与81.2%。将推导的美国红鱼和大黄鱼β-珠蛋白氨基酸序列与其他鱼类及人β-珠蛋白氨基酸序列进行同源性比较,其同源性在35.5%～70.3%,它们与同属真口鱼纲的真鲷、黄尾鲱鱼、鲤鱼、虹鳟等的同源性较高,而与肉鳍鱼纲的肺鱼及板鳃纲的鲨鱼的同源性较低;二级结构预测表明,美国红鱼和大黄鱼β-珠蛋白存在类似哺乳动物的8个α-螺旋区,在近端与远端与血红素结合的组氨酸高度
3、保守。关键词美国红鱼;大黄鱼;β-珠蛋白;克隆中图分类号Q785文献标识码A文章编号0517-6611(2007)09-02555-03MolecularCloningandGeneticEvolutionAnalysisofβ-globincDNAsfromRedDrumandLargeYellowCroakerCHUWu-yingetal(DepartmentofBiomedicalEngineering,ZhejiangUniversity,Hangzhou,Zhejiang310027)A
4、bstractTheβ-globingeneandaminoacidsequenceoflargeyellowcroaker(Pseudosciaenacrocea)andreddrum(Sciaenopsocellatus)werefirstde-scribed.Theentireopenreadingframesoftwoβ-globingeneswereboth447bplongandcodified148aminoacidresidues.Thehomologybetweenthemwas
5、90.4%fornucleotidesand81.2%fordeducedaminoacids.Aminoacididentityoftwoβ-globingenescomparedwiththosereportedinothervertebratesincludingshark,teleostsandhuman,rangedfrom35.5to70.3%.Theproximalhistidineresiduesatthehemebindingregionandtheimportantfuncti
6、onalresiduesthatwereinvolvedinthecontactswiththehemeandbetweeninterfaceswereconserved.KeywordsReddrum;Largeyellowcroaker;β-globin;Cloning脊椎动物的血红蛋白(Hb)都是细胞内的载氧蛋白,由珠1材料与方法蛋白和血红素构成。原始的脊椎动物如七鳃鳗的血红蛋白1.1试验材料大黄鱼和美国红鱼系浙江省象山港的健康是单聚体,更高等的脊椎动物的Hb是由2条α-珠蛋白链和2成鱼,体
7、重约400g,于流水试验槽中控温暂养1周,暂养期间[1]条β-珠蛋白链所组成的四聚体。近年来国外对鱼类Hb的水温控制在(22±2)℃,溶氧6mg/L,每日投喂约占体重晶体结构、生理功能、分子进化等进行了研究并取得了长足1.5%的颗粒饵料。进展,但是欧美和日本学者将研究集中在青鱼将、斑马鱼等少1.2菌株和质粒E.coliDH5α菌株该室保存,克隆载体数几种模式鱼类,而其他鱼类珠蛋白及其基因的研究报道很pGEM-TEasyvector购自Promega公司。少。石首鱼科的大黄鱼是我国特有的经济鱼类之一
8、,以体色1.3工具酶与试剂限制性内切酶、2000bpDNAmarker购金黄、味道鲜嫩而闻名。笔者克隆了大黄鱼和美国红鱼的β自大连宝生物工程公司,RNA提取试剂盒购自QIAGEN公珠蛋白基因,并将两者氨基酸残基序列进行了比较,为下一司,其他试剂均购于上海生工生物工程公司,引物由上海博步体外重组基因导入试验奠定基础。亚生物工程技术有限公司合成。图1大黄鱼和美国红鱼β-珠蛋白核苷酸序列1.4总RNA的提取与反转录取新鲜脾脏组织10mg,用基金项目中国科学院海外杰出学者基金项目(2005
