DHPLC在遗传性疾病基因分析和诊断中的应用DHPLC进行β-珠蛋白

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1、DHPLC进行B-珠蛋白基因突变筛查的可靠性ReliabilityofDHPLCinmutationalScreeningofB-Globin(HBB)AllelesHUMANMUTATION19:287-295(2002)摘要：遗传性血红蛋白疾病代表了世界范

2、韦

3、内最常见的孟徳尔遗传疾病，该病在地屮海，亚洲，非洲，和印度高发。B-珠蛋白基因上200多种突变是引起血红蛋白病理和B地中海贫血综合征的原因。该疾病的防治措施基于在高危人群中，在产前或出生后对杂合性携带者或病人进行基因诊断，这就需要一种可靠的突变筛杏方法。我们基于变性高效液相色谱(DHP

4、LC)技术发展了一种快速和的高特异的突变检测方法。为了评估该方法的灵敏度和特异性，我们应用DHPLC技术筛查了30例正常意大利人和40例杂合性携帯者样本，以前通过多重ARMS技术已证实这些携带者样本的B-珠蛋白基因含有25种不同的突变。结果显示DHPLC分析的灵敏度和特界性都是100%。所有以前证实了的25种突变和2种以前未检测到的多态都准确检测出来了，既无假阳性也无假阴性。另外，我们还成功检测到了12种复合的杂合突变和4种纯合突变。总Z,该方法能快速检测鼓常见的B-珠蛋白基因突变，这些突变约占97%意大利人群的B-珠蛋白基因突变。与经典的突变筛

5、查技术比较，该方法快速，高灵敏，性价比高，并J1能半口动化地对大量的样本进行筛査。变性高效液相色谱(DHPLC)全面和快速分析囊性纤维化疾病的膜转导调节因子(CFTR)基因：遗传咨询中的应用Completeandrapidscanningofthecysticfibrosistransmembraneconductanceregulator(CFTR)genebydenaturinghigh-performanceliquidchramatograpgy(D-HPLC):majorimplicationsforgeneticcounselingH

6、umGenet(2001)108:290-298摘要：Fl前发现膜转导调节因了(CFTR)棊因冇900多种突变和200多种多态。虽然CFTR已被克隆了十年，但是全面扫描其所有27个外显子的已知和未知突变仍然面临技术上的挑战。快速准确检测突变对于囊性纤维化疾病(CF)高危家系的产前诊断以及理解基因型和表型Z间的关系非常重要。木研究报道了成功应用变性高效液相色谱(DHPLC)技术全面和快速分析CFTR基因的所有编码序列。我们用27对引物扩增了所有编码序列，优化了每个扩增产物的分析温度，并U用1552例來自法国和其它欧洲国家的CF病人的样本进行了验证,

7、这些样本以前证实在该基因的所有的熔链域都含有突变或多态。DHPLC分析检测到了415个以询经变性梯度凝胶电泳和测序检测的突变和74个新突变，这种新技术对筛查DNA序列变异非常准确(迄今对CFTR等为基因的检测为100%)和快速(对CFTR全基因的检测不到一周)。DHPLC分析技术将会减少群体屮未分型的CF等位基I大1,从而降低高风险CF配偶中剩余的CF风险。这种技术不仅对CF病人很重要，并且対其它具有多位点，高频率突变的基因检测也非常有意义。遗传异质性疾病的突变筛查:DHPLC技术和DNA测序技术对引起腓骨肌萎缩症的多种基因的突变的检测比较Scr

8、eeningformutationsinageneticallyheterogeneousdisorder:DHPLCversusDNAsequenceformutationdetectioninmultiplegenescausingCharcot-Marie-ToothneuropathyGeneticsinMedicineSept./Oct.2001.Vol.3No.5,335-343目的：以腓骨肌萎缩症(CMT)为模型，评估变性高效液相色谱(DIIPLC)技术进行遗传异质性疾病突变筛査的效率。方法：(1)以PMP22,MPZ,GJB1和E

9、GR2基因中已知的50个序列变异为研究对象，优化DHPLC进行突变筛查的条件；(2)比较DHPLC技术和DNA测序技术检测168例病人样本中的突变。结果:我们建立了DHPLC技术检测PMP22,MPZ,GJB1和EGR2基因突变的最优条件，在此最优条件下，DHPLC技术和D7A测序技术-样灵敏，并且DHPI.C技术检测到了2个测序未检测到的突变。结论：DHPLC技术提高了遗传异质性疾病突变筛查的效率和灵敏度。DHPLC技术检测不相关的腓骨肌萎缩症病人中MTMR2基因突变提示其在遗传性神经性疾病中发生低频率突变DenaturingHigh-perf

10、ormanceliquidchromatographyofthemyotubularin2gene(MTMR2)inunrelatedp