应用MPCR-DHPLC技术检测转基因大豆及其食品-论文.pdf

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1、第31卷第6期大豆科学V01．31NO．62012矩12月S0YBEANSCIENCEDec．2012应用MPCR—DHPLC技术检测转基因大豆及其食品陶然，郭顺堂(中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083)摘要：利用多重PCR结合DHPLC技术，建立了高通量快速筛选检测转基因大豆及其食品的方法，确立了转基因大豆品系鉴定方法。该筛选方法的检测灵敏度为0．078ng·～，质粒检测灵敏度为1X10拷贝·～。利用该方法对转基因大豆GT-403—2、Mon89788、A5704．12和大豆食品曲奇饼干、含大豆的调味粉、干豆腐及非转基因黑

2、大豆进行验证，效果良好。所建立的PCR—DHPLC检测方法能同时快速准确的检测大豆及加工食品中转基因成分。关键词：多重PCR；DHPLC；转基因大豆中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000-9841(2012)06-0976-04DetectionofTransgenicSoybeanandItsFoodbyMPCR·DHPLCMethodTA0Ran，GU0Shun．tang(CollegeofFoodScience＆NutritionalEngineering，ChinaAgriculturalUniversity，Be

3、ijing100083)Abstract：Theaimofthisworkwastodevelopamethodforsimultaneousdetectionofavarietyofgeneticallymodified(GM)soybeaningredientsinfoodsandtoidentifythelinesoftransgenicsoybeanbyusingmuhiplexpolymerasechainreaction(PCR)coupledwithdenaturinghighperformanceliquidchromato

4、graphy(DHPLC)assay．ResultsshowedthatthemultiplexPCR—DHPLCmethodwashighlyspecificforthetargetgeneswith0．078ng·txL～ofhighsensitivity．Detectionsensitivityofstandardplasmidwas1X10copy·IxL～．IdentificationanddetectionofgeneticallymodifiedsoybeaningredientsinGT-40—3—2，Mon89788，A5

5、704—12，cookies，seasoningpowdercontainingsoybean，driedtofuandnon—geneticallymodifiedblacksoybeanwereeffective．MuhiplexPCR—DHPLCmethoddevelopedinthisworkwillbeabetteralternativefortherapidandhigh—throughputdetectionofmanygeneticmodificationeventsinsoybeananditsprocessedfoods

6、imultaneously．Keywords：MultiplexPCR；Denaturinghigh—performanceliquidchromatography(DHPLC)；Geneticallymodifiedsoybean自1988年Hinchee⋯等首次利用农杆菌介导限达0．1％。Oefner等1995年研究并开发了变性法将J7、『P哪基因和草甘膦抗性基因导入了大豆获得高效液相色谱(又称核酸片段分析仪，DHPLC)技第一例转基因大豆以来，转基因大豆发展迅速。目术，它是一种快速，自动和高通量检测核酸的技术前，国际市场上转基因大豆主

7、要是抗除草剂转基因平台。大豆和抗虫转基因大豆。应用面积较大的是抗本研究以多种转基因大豆品系为材料，应用多草甘膦转基因大豆。另有改良性状的新转基因大重PCR结合DHPLC技术对转基因大豆进行检测。豆品种也相继问世，如杜邦公司培育出的油酸含量拟建立高通量快速筛选检测转基因大豆的方法，同达70％以上的大豆品种；在美国，低亚麻酸、低棕桐时构建了标准分子质粒，确定该检测方法的灵敏酸、高硬脂酸、高棕榈酸等转基因大豆品种也培育度，为转基因大豆及其加工食品的检测和市场标签成功。由此可见，转基因大豆在转基因作物及未来标识及监管提供技术支持。食品中占有重要地位

8、。但是转基因大豆在给人类l材料与方法带来巨大利益的同时也可能对人体健康及生态环境带来潜在的风险，所以建立一套能够准确、快速、1．1材料高通量的筛选检测转基因大豆的检测方法特别1．