综述测定蛋白质序列的方法进展.doc

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1、综述测定蛋白质序列的方法进展当前测定蛋白质主要依靠实验仪器來完成，而今测定蛋白质最高效的是419型蛋白质测序仪。适于各种方法制备样品的测序：电转移印迹法、PVDF膜上样殆或HPLC等溶液样殆，还适于各种蛋白的测序。一、蛋白质N■端肽特异性识别与测序的方法和试剂盒用于蛋H质N端肽段的识别与测序的方法，该方法包括：（a）用一种或多种弧基化试剂对蛋白的侧链氨基进行修饰，封闭蛋白所有侧链氨基；（b）用一种或多种化学试剂对蛋白质N—端氨基进行修饰；（c）用一种或多种还原剂打开蛋白质分子中的二硫键，破坏其高级结构；（

2、d）用一种或多种烷基化试剂封闭疏基防止其重新形成二硫键；（e）用一种或多种化学消化或酶消化法对蛋白质进行消化，以产生适于质谱分析的肽段；（f）用质谱分析技术特异性识别并分析蛋H质N端肽段，产生二级质谱图；（g）对质谱数据进行解析，以鉴定蛋白质并得到蛋白质的N端序列信息。其特征在于所述步骤（b）的修饰方法为：用稳定同位索标记的酸酊•试剂，特异性对蛋白质N—端氨基进行修饰；再用一种或多种含游离氨基的化学试剂，对蛋白质的修饰反应进行终止。