蛋白质的测定方法

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1、天津农学院职业技术学院毕业论文题目：有机酸的测定方法及其研究进展作者：曲洪双系别：生物工程系班级：08生物技术指导教师：童应凯目录1.引言（前言）2.蛋白质的总量的测定方法2.1半微量凯氏定氮法（水蒸气蒸馏法）2.2双缩脲比色法2.3紫外吸收法2.4考马斯亮蓝染色法2.5蛋白氮与非蛋白氮含量的测定2.6Folin—酚试剂法3．蛋白氮与非蛋白氮含量的测定3.1游离α—氨基氮的测定3.2赖氨酸含量的测定3.3色酸氨含量的测定3.4蛋氨酸含量的测定3.5苯丙氨酸含量的测定3.6混合液中各种氨基酸含量的分离测定4蛋白质分析的研究进展4.1分光光度法4.2荧光光度法4.3共振散射光度法参考文献蛋白质和氨

2、基酸的测定方法与研究进展摘要：综述了近年来蛋白质分析的研究进展，重点阐述了国内分光光度法、荧光光度法以及共振瑞利散射光度法在蛋白质测定研究中的应用，探讨了相关领域的研究发展趋势及方向。：综述了近年来蛋白质分析的研究进展，重点阐述了国内分光光度法、荧光光度法以及共振瑞利散射光度法在蛋白质测定研究中的应用，探讨了相关领域的研究发展趋势及方向。关键词：蛋白质、氨基酸、测定原理、分析方法、研究进展1引言蛋白质是生命物质的基础，是生命科学研究的其中主要内容之一，不同的蛋白质种类具有不同的生物功能，它是由二十种-氨基酸通过酰胺键（肽键）特定联成的长链分子（即所谓的肽链）。部分蛋白质还以上包含非肽链结构的其

3、它组成成分，这种成分称为配基或辅基。蛋白质的元素组成除含碳、氢、氧、氮和少量硫外，还含有微量的磷、铁、锌、铜、钼、碘等元素。其中氮的含量较恒定，平均为16%。因此，一般可由测定生物样品中的氮，粗略地计算出其中蛋白质的含量（每1g氮相当于6.25克的蛋白质）。蛋白质的基本组成单位为氨基酸，构成天然蛋白质的氨基酸共约20种。除脯氨酸外，均为-氨基酸，即羧酸分子中-碳原子上的一个氢原子被氨基取代而成的化合物。各种蛋白质所含的氨基酸的数目和种类都各不相同。每一种天然的蛋白质都有自己特有的空间结构，而这种空间结构通常称为蛋白质的构象［1］。为了表示蛋白质结构的不同组织层次，科学家们采用了专门的术语：一级

4、结构指组成蛋白质分子的氨基酸的排列顺序。二级结构即多肽链的局部在一维空间上的排布（构象）关系，其中最常见的类型是-螺旋和-折叠片。三级结构指多肽链借助各种次级键（非共价键）盘绕成具有特定肽链走向的紧密球状构象。如果蛋白质由一条以上多肽链构成，称为四级结构，它涉及多肽亚基的空间排布和它们之间相互作用的性质。蛋白质的种类繁多，结构复杂，迄今为止没有一个理想的分类方法。近年来有些学者提出依据蛋白质的生物功能进行分类，把蛋白质分为酶、运输蛋白质、营养和储存蛋白质、收缩蛋白质或运动蛋白质、结构蛋白质和防御蛋白质。据估计每个人大肠杆菌约有3000种不同结构的蛋白质分子，复杂的人体则有100000种以上。正

5、是依靠这些多种多样的蛋白质分子生物体才能精确地完成某种复杂的生理功能。因此，蛋白质的定量分析在生命科学、临床医学和食品分析等方面具有重要意义。本文综述近年来国内蛋白质分析研究的某些进展，内容涉及分光光度法、荧光光度法、共振散射光度法测定蛋白质研究的进展。。测定完后可用乙醇将比色杯洗干净。2、蛋白质的总量的测定蛋白质含量可以从它们的物理化学性质如折射率、相对密度、紫外吸收、染色等测定而得知;或用化学方法如凯氏定氮、双缩尿反应、Folin—酚试剂反应等方法来测定。其中，凯氏定氮法氏蛋白质定量的经典方法，但操作繁琐。Folin—酚试剂法和染色法氏一般实验室中经常使用的方法。这类方法操作简便、迅速、不

6、需要复杂好昂贵的设备，又能适合一般实验室的要求，若作一般测定较为适宜。2.1半微量凯氏定氮法（水蒸气蒸馏法）2.1.1样品与硫酸一同加热消化，含氮有机物即分解产生氨，氨与硫酸结合生成硫酸铵留在溶液中。在定氮仪中，加入强碱碱化，使硫酸铵分解放出氨，借水蒸气将氨蒸至硼酸溶液中，生成四硼酸按，用标准盐酸溶液滴定，即可求的样品中总氮量，并换算出蛋白质含量。消化：有机含氮物+H2SO4→CO2↑+SO2↑+H20↑+NH3↑2NH3+H2SO4→(NH4)2SO4蒸馏：(NH4)2SO4+2NaOH→2H2O+Na2SO4+2NH3↑吸收：2NH3+4H3BO3→(NH4)2B4O7+5H2O滴定：(N

7、H4)2B4O7+2HCl+5H2O→2NH4Cl+4H3BO32.1.2.试剂(1)浓硫酸—过氧化氢—水混合液（2+3+1）在100mL水中缓慢加入浓硫酸200mL冷却后再加入3%过氧化氢300mL，混合备用。此液存放阴凉处可保存一个月。(2)混合指示剂贮备液取50mL1g/L溴甲酚绿无水乙醇溶液与200mL1g/L甲基红无水乙醇溶液混合，贮于棕色瓶中备用。(3)硼酸—指示剂混合液取100mL2