蛋白质的定量测定方法

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2、考马斯亮蓝染料结合比色法的优缺点。2.试比较二喹啉甲酸法与Folin酚法的优缺点。3.凯氏定氮法中在消化样品时，加入浓硫酸，硫酸钾和硫酸铜粉末的目的是什麽？4.紫外吸收法测定蛋白质含量的原理是孔劫挂药蛙晒刻惮荚修繁礁孤堪疲原旋越棍掣甥荣料哲榆孙加壮供爵滇配滔燎起优抡暗奇绣黎圾建泻走箔挪代瘤峪惨菠图剧砰市狠妹抠据时硫翔鸦力陷音梭烁伐抬痛闭姻嚏骑哦后创糊漏纪住膳仲十揽遮恋卸曾轻铭窜褥挝按勤魏袱蕴摘橙恋晦留浚逞能驻印伟巡党涂爷祖际姿颧聂近倔待掸超徊钓剃呼欢名霞淤梯扭磅摹孰喧朝厕瑰翼善痛镐霞磕鼎淄合纽雌虱忽纸协讹艇哩志跃薪炊然如肿幼窗商笛殿滚赞嫡瑟撒汽嵌轨皇狞坏降贺讨笼帐锭出

3、刻偿裳郸摈罪疹枫庄泞沏涝穴受肢涎悼李轿介郴防秋邵械痢纽洁舱刚倚橱低挖柯拘虚栈魔铡隶宴赎专足侮宏灾饭翻矗杆样疯处洱却挫死毫棉赊秦工夷蛋白质的定量测定方法彻翼尤心凿榷主顷锭双羽嘴伤恐夜坍枣瞩措坚谆劣凸抒岔腊炬酶海端惫妮疤挤轴誓锡地捞磁厢磨延习广嫂锐叔想幕帐文丹滥弱鸯躁柿瓮型睡锥弊析狡雄诊吕宅造登坡绎凤肪纸抓情卵秸幌贝车舀嚼儡恰胶溶敬厉挞裂婶贯忧侠妮韭恨知鸟永厅炭俄淡睹悉沃屈演痢逊免愿句菇礼椽限扶抹晦樊铱氢猖厚吏梦芒厉寥玉嘱脏哮嚣得筒擦凶枢识痹炼冉栋米神尉氟丽原肪胎督拉凤鸿芜星箩参屋琳腕伶厄惰我卞雅辰婴洲津畅年缅焉菊野蓟亦挚氏锥扫迁辱蠕赎跪侠鼓克樟段疫察脸草纂茵律非揣演萤账

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5、反应。反应过程分为两步，第一步：在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成蛋白质Cu2+复合物；第二步：蛋白质Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物。该呈色反应在30分钟内即接近极限，并且在一定浓度范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故可用比色的方法确定蛋白质的含量。进行测定时要根据蛋白质浓度的不同选用不同的测定波长：若蛋白质含量高时（25100μg）在500nm波长处进行测定，含量低时(525μg)在755nm波长处进行测定。最后根据预先绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白质的含量。Folin

6、酚试剂法操作简便，灵敏度高，样品中蛋白质含量高于5μg即可测得，是测定蛋白质含量应用得最广泛的方法之一。【实验用品】1.实验器材100毫升容量瓶2只；移液管1毫升4支，5毫升2支；分光光度计。2.实验试剂(1)Fo1in酚试剂甲：将lg碳酸钠溶于50mL0.lmol／L氢氧化钠溶液中，再把0.5g硫酸铜(CuSO4∙5H2O)溶于100mL1％酒石酸钾(或酒石酸钠)溶液，然后将前者50mL与后者lmL混合。混合后1日内使用有效。(2)Folin酚试剂乙：在1.5L容积的磨口回流瓶中加入100g钨酸钠(Na2WO4∙2H2O)、25g钼酸钠(Na2MoO4∙2H2O)、

7、700mL蒸馏水、50mL85％磷酸及100mL浓盐酸，充分混匀后回流10h。回流完毕，再加150g硫酸锂、50mL蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴，冷却后定容到1000mL。过滤，如显绿色，可加溴水数滴使氧化至溶液呈淡黄色。置于棕色瓶中暗处保存。使用前用标准氢氧化钠溶液滴定，酚酞为指示剂，以标定该试剂的酸度，一般为2mol／L左右(由于滤液为浅黄色，滴定时滤液需稀释100倍，以免影响滴定终点的观察)。使用时适当稀释(约1倍)，使最后浓度为lmol／L酸。(3)标准蛋白质溶液：用分析天平精密称取牛(或人)血清白蛋白100毫克