盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度应用中存在问题及应注意问题

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1、种子世界Zhongzishijie盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度应用中存在问题及应注意问题贾敏(辽宁省朝阳北票市种子管理站)盐溶蛋白电泳鉴定玉米种子纯度具有快速、准确、低廉七、谱带分界还清等优点，特别是2001年列入本行业标准以后，被各检验室广某一柱胶或板胶样品染色后其蛋白质区带界限不明显泛采用。我单位于1996年开始利用盐溶蛋白电泳测定玉米是由于蛋白质水解过度。种子纯度．经多年实践探索，发现实验结果存在以下问题及八、谱带染色密度不同实验当中应该注意的一些问题。常常是由于凝胶表面参差不齐．使样品在电泳前积聚在一、凝胶不合格较低的部位，粗心、

2、覆盖凝胶无经验或凝胶聚合时振动，都引通常是由于制备的试剂浓度不够准确．或者凝胶混合液起凝胶表面不平。中漏加某一试剂．也可能是试剂不纯或失效。最简单的补救九、重现性不佳办法是弃去溶液并用纯的有效试剂重新配制一批新鲜溶液。通常是由于样品制备所引起的．而与聚丙酰胺凝胶电泳二、聚合太快或太慢无关。染色的颜色变淡或某一组分区带完全消失可能是由于为获得均一浓度的凝胶。理想的凝胶、聚合作用通常在蛋白质被水解。就像以前不能观察到快速泳动带的现象一l0～30分钟内发生。纠正聚合太快或太慢的方法是改变催化样，在制备样品的过程中，低温操作及应用蛋白酶抑制剂能剂

3、浓度。消除这类现象的发生。三、凝胶龟裂十、谱带运动轨迹不直龟裂通常在高浓度凝胶上发生。常常是由于聚合反应本在正常情况下。蛋白质在电场作用下。直线泳动而形成身产生过量的热。可以用冷溶液来补救，电泳是凝胶发生龟正常的谱带，但由于凝胶浓度不均匀，存在气泡和温度太高裂，是由于输入的电流过大从而使凝胶过热引起的，可以用等因素的影响而可能形成弯曲的谱带。较小的电流在较长的时间内电泳来弥补。在实验当中会出现以上不正常现象，所以我们在实验四、加样后不能在样品槽底形成一层样品层操作中应当注意在以下五方面操作。这表明样品缓冲液中偶然遗漏加蔗糖和甘油，或者是。

4、由1．测试样品的分取、研磨于样品梳齿未能与玻璃板贴紧，结果是凝胶在梳齿和玻璃板取样按

5、散失，主要是胚部不能丢失(胚部的表面有时观察到一薄层考马斯亮蓝膜，此时可以将凝胶浸含有所提取大量蛋白质)，因胚部含油分较高，粉碎后样品易入50％甲醇快速冲洗．或者用甲醇浸泡过滤纸轻擦表面将膜粘在磨上．要注意用小刷子刷去，一并放入离心管中。除去。2．蛋白质的提取六、电泳谱带拖尾现象将单粒种子研磨后放人离心管中．按1：1的量加入蛋白可能是由于样品缓冲液被污染，若污染贮液槽缓冲液，质提取液。提取液加人量过多，蛋白质溶液过稀，电泳谱带不则整个凝胶．其中包括板胶中不加样品的样品槽均出现连续明显；提取液加入量过少，蛋白质提取不完全，影响结果。可不断的

6、染色区。办法是重新配制缓冲液。以在低温下提取白籽Zhongzishijie9曩浅论杂交玉米制种花期预测与调节李明慧李亚军(锦州农业科学院)杂交玉米制种产量高低的关键在花期是否相遇。而花期(1)同期播种。制种玉米双亲花期相同或父本比母本叶相遇的关键在于及早预测和调节。因此，及早做好制种玉米片数多1片的情况下，一般采用同期播种，花期相遇较好。的花期及调节十分重要。(2)错期播种。错期播种是指制种玉米双亲花期相差5一、花期预测天以上，或者虽然花期相差2天左右，但母本雌雄不协调，吐杂交玉米花期预测的方法很多，经实践观测，认为最准丝推迟较多的情况下

7、，采用错期播种。在管理上，先期花期较确的有以下两种：晚的亲本．隔父母本花期相差天数的1．5～2倍时间再播另一1．叶片检查法亲本。由于玉米花粉生活力仅几个小时，散粉期短，而果穗花在玉米拔节后检查母本和父本的叶片数．如果两个亲本丝生活力则可维持7天左右时间，在安排错期播种时要掌握的总叶片数相同。而母本已出叶片数比父本多1～2片时，花“宁要母等父，不要父等母”的原则。另外，对从外地新引进的期才能良好相遇。如双亲的总叶片数不同，或者双亲的总叶杂交组合，要摸清其生育期。确定在当地的错期天数。若时间片数不确定。则应根据父本和母本已出叶片数、出叶速度和

8、不允许，可依据引种规律和经验确定一个范围，然后将父本未出叶片数而定。如母本未出叶片数保持比父本少1～2片叶种子分为三份分三期播种，从而延长父本的散粉期，确保制时，则花期相遇良好；如超过2片或少