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1、盐溶蛋白电泳检测玉米种子纯度的操作技术安徽农业科学.Journal0fAnhuiAge.Sci.2OO6.34(11).'2344—2345责任编辑庆珞责任校对庆珞盐溶蛋白电泳检测玉米种子纯度的操作技术孟超敏,郑跃进,姬俊华2,马占强,刘素云,张念辉(1.河南科技大学农学院,河南洛阳471003;2.洛阳大学环境与化学W程学院,河南洛阳471023;3.河南省汝阳县种子公司,河南汝阳4712OO)摘要介绍了玉米种子盐溶蛋白电泳鉴定真伪及纯度的操作技术,并对该方法在实际应用中应参照的国标及存在的问题进行了分析和探讨.关键词玉米;电泳;品种纯度;操作技术
2、中图分类号$513文献标识码B文章编号0517—6611(20(~)11—2344—02ProbehltotheKeyTodmiqueandProblemsinldlmtiflealioaofVarietyandAlUminaSMClmo-miaetal(AgriculturalCollege,HenanUniversityofScienceandTechnology,I.uoyang,Henan471003)AJasa'actInthispaper,thekeytechniquesinthep~_edta'eofmaizeseedsalt—solu
3、bleproteinelectrophoresiswel,~clarified.Theproblemintheactualappraisalworkwereanalyzedanddiscussed.KeywordsMaize;Electrophoresis;Varietypurity;Keytechnique品种纯度是种子质量的重要指标,品种纯度鉴定是种子生产工作中不可缺少的重要环节.目前,品种纯度检测方法有很多,主要有田间种植鉴定和室内检测_lJ.在诸多室内检测方法中,电泳法是较为常用的方法[2.3],是近几年国际种子检验协会(ISTA)推荐的几种
4、比较可靠的方法之一_4],全国农技服务中心组织全国11个省的质检机构连续3年的联合攻关研究和完善,制订了玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定法(№Y449—2001),该方法的制订与实施,填补了我国自行研制种子生化测纯标准方法的空白,为我国玉米种子室内纯度鉴定提供了重要手段_3jJ.因此在农科高年级学生专业实验课中开设品种纯度电泳鉴定的操作实验非常必要.笔者介绍该方法在实验中的操作技术,并分析在实际应用中存在的问题.1操作技术【5-】1.1溶液配制1.1.1准备好合格的药品.所用化学试剂应为分析纯或合格的化学纯,盐溶蛋白电泳法属生化方法,需用化学试剂15种配
5、置多种操作溶液,要注意化学试剂的纯度和质量,还要注意个别试剂容易失效变质.如硫酸亚铁和抗坏血酸都是还原性试剂,若放置时间过长或密封不好,很容易被氧化变质,失去对凝胶的催化作用,导致凝胶不凝固或凝胶效果不好;过氧化氢是凝胶形成的引发剂,它容易在高温或光照下分解而变质;乳酸钠和乳酸溶液在高温下受到微生物的作用而变质沉淀;凝胶溶液会在光照下发生聚合.因此,购买试剂时应注意其产地,厂家,生产日期和密封情况.配制好的溶液应装在棕色瓶中放冰箱低温保存,凝胶液应在14d内使用,其他溶液可以保存60d.1.1.2严格按配方配置溶液.在配置溶液时,应做到称量准确.在称
6、取极少量试剂(如;硫酸亚铁)时,可采用加倍称取,稀释取用的方法,以减少称量误差;在用酸度计调节浓缩胶缓冲液的pH值时,可用乳酸原液经稀释后再调节的方法更为有效.基金项目河南科技大学实验基金项目(SY0405047)和人才科学研究基金项目(04055).作者简介孟超敏(1977一),男,陕西成阳人,硕士,讲师,从事种子与生物技术育种的教学及科研工作.收稿日期2oo6o3-o71.2样品制备1.2.1磨碎过程要仔细.样品磨碎时要注意,单粒样品磨碎器要清理干净,如果用钳子代替单粒粉碎机粉碎种子时,应垫上小片清洁的布或纸,防止交叉污染.磨碎时要特别注意不能有
7、样品散失,尤其是胚部不能丢失,因为胚部含油分较高,在样品含水量高时,粉碎后的样品容易粘在单粒粉碎机或白布上,这时一定要将其清理下来并与其他部分一起放入离心管中.如果样品的水分高,可在40℃烘箱中烘干1～2h,使水分达标后再进行粉碎.同时每粒种子粉碎的程度或细度应基本一致,以保证各管样品提取蛋白质含量基本一致.1.2.2加人提取液要适量.单粒样品均匀粉碎后,在加人提取液时,应注意尽量加人与样品同体积的量,特别是小种子,如加人与大种子同量的提取液,则蛋白质浓度低,影响电泳质量,谱带色淡,易错判.1.3电泳操作1.3.1胶室要清洗干净.电泳凝胶是在两块玻璃
8、板组成的胶室中形成的,灌胶前要求将玻璃板充分洗净,擦干,否则会使封胶时部分胶和电泳槽或玻璃板粘合不紧,留有缝
