原生质体融合技术及其在果酒酵母育种上的应用

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1、生物工程食品研究与开发第20310卷年第99月期l63==I原生质体融合技术及其在果酒酵母育种上的应用陈娟，阚建全，杨蓉生，杜木英(1．西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041；2．西南大学食品科学学院，重庆400715)摘要：对原生质体融合技术的研究进展进行概括，论述该技术的重要环节，包括遗传标记选择、原生质体制备、再生和融合以及融合子的鉴定等。通过分析其在降酸、增香、嗜杀活性和抗氧化性等优良性状整合上的研究结果，表明原生质体融合技术在优良果酒酵母育种上具有广泛的应用前景和重要的应用价值。关键词：原生质体融合；果酒酵母；选育ProtoplastFusion

2、TechnologyandItsApplicationinWineYeastBreedingCHENJuan，KANJian—quan，YANGRong-sheng，DUMu-ying2(1．CollegeofLifeScienceandTechnology，SouthwestUniversityforNationalities，Chengdu610041，Sichuan，China；2．CollegeofFoodScience，SouthwestUniversity，Chongqing400715，China)Abstract：Theresearchprogresso

3、fprotoplastfusiontechnologyisoutlinedandtheimportantaspectsofthetechnologyincludingselectionofgeneticmark，preparation，regenerationandfusionofprotoplastsaswellasidentificationoffusantsarediscussed．Throughanalysisofresearchresultsonacidmodification，aromaimprovement，killercharacter，antioxid

4、ation，itisclaimedthatprotoplastfusiontechnologyhasabrightfutureinbreedingofexcellentwineyeasts．Keywords：protoplastfusion；wineyeast；breeding1原生质体融合技术的研究进展高了融合频率。1912年，I_amnbent在观察多核细胞形成的过程1978年，第三届工业微生物遗传学讨论会上，原时首次发现了细胞融合现象。1960年，日本的Okadat生质体融合作为一种新的基因重组手段被提出来，引发现并证明了紫外灭活仙台病毒可诱发体内艾氏腹起了全世界

5、的关注。此后，该技术逐渐深入到微生物的水癌细胞彼此融合，开拓了细胞融合研究的先河。1953遗传、生理、代谢、形态方面的研究和工业菌株选育工年，Weibull等用溶菌酶制备得到了巨大芽孢杆菌的原作中，极大地推动了微生物研究的进程。生质体，并提出了原生质体的概念。Eddy和Emmerson又以酶法相继制备出了酵母菌和丝状真菌细胞的原2原生质体融合技术生质体，为微生物的细胞融合开辟了道路。1974年，加原生质体融合技术(protoplastfusion)又称为细胞拿大籍华人高国楠发现聚乙二醇(PEG)在ca参与下融合技术，是指用酶法去除细胞壁，制成由原生质膜包能促进植物细胞原

6、生质体融合，这一发现极大地促进被的原生质体，然后采用物理、化学或生物学方法诱导了细胞融合技术的发展，使该技术跃上了新的阶段。遗传特性不同的两亲本原生质体融合，发生染色体交在融合方法上，除了传统的化学方法外，1980年换、重组而达到杂交的目的，并筛选获得集双亲优良性Zimmermann[31等报道电场诱导细胞融合，1988年张状于一体的稳定重组体的一种育种方法【5】。微生物原闻迪等又报道激光诱导动物细胞融合，都进一步提生质体融合技术是通过改变微生物细胞的遗传性进行育种，其可以在种内、属内、属间甚至跨界进行，并且在作者简介：陈娟(198O一)，女(汉)，讲师，博士，研究方向

7、：果酒发酵。各个领域中都取得了一定的效果[61。刚第31卷第9期食瓦品明研耵究与司开丌发援生物工程-==J76微生物原生质体融合技术的整个过程包括：原生原生质体融合处理后，在荧光显微镜下观察并通过显质体的制备、原生质体的融合、原生质体的再生和融合微操作，直接挑选出带有两种荧光的原生质体(已融合子的性能鉴定等。国内外学者在每一个环节上都做了原生质体)。使用这种方法时，两种荧光染料的区分要大量的研究工作，取得了显著的成就。明显，两种荧光染料的浓度、处理时间要掌握好。2．1遗传标记的选择2．1．5利用某些特殊生理特征作为标记选择融合子2．1．1