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1、贵州农业科学2007,35(3):139～141GuizhouAgriculturalSciences[文章编号]1001-3601(2007)03-0159-0139-03原生质体融合技术及其在微生物遗传育种上的应用1,22＊1丁朋晓,杨季芳,谢和(1.贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;2.浙江万里学院生物与环境学院,浙江宁波315100)[摘要]原生质体融合技术是微生物遗传育种上一项重要技术,它具有遗传信息传递量大,不受亲缘关系的影响,可有目的地选择亲株以选育理想的融合株,便于操作等优点,在遗传育种中具有广阔的应用前景。本文从原生质体的制备及其影响因子、原生质体融合的
2、促融方法、原生质体融合子的筛选以及融合技术在微生物菌种选育中的应用等方面进行了综述。[关键词]原生质体;原生质体融合;遗传育种[中图分类号]S933[文献标识码]AApplicationoftheProtoplastFusionTechniqueinMicrobialGeneticandBreeding1,22＊1DINGPengxiao,YANGJifang,XIEHe(1.CollegeofLifeScience,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025;2.CollogeofBiologicalandEnvironmentScience,
3、WanliUniversity,Ningbo,Zhejiang315100,China)Abstract:Thetechniqueofprotoplastfusionwithadvantagesoftransmittingalargequantityofgeneticinformation,havinglittleinfluencefrombloodrelationship,selectingparentstrainsonpurposeforbreedingtheidealfusionstrainsandoperatingeasily,hasthewideapplicationpr
4、ospectinmicrobialgeneticandbreeding.Thepapersummarizesthepreparationofprotoplastanditsinfluencingfactors,theacceleratingmethodofprotoplastfusion,theselectionoffusantsandtheapplicationofprotoplastfusioninmicrobialstrainsbreeding,etc.Keywords:protoplast;protoplastfusion;geneticandbreeding原生质体融合(
5、protoplastfusion)是细胞融合影响原生质体形成的因素很多,不同的微生物(cellfusion)的一个组成部分。由于对植物细胞和有其较为适当的形成条件。在菌龄的选择上,多采微生物细胞进行细胞融合时,必须除去细胞壁,而剩用对数生长期或生长中后期的菌,这是因为,菌体的余的部分称为原生质体(protoplast),所以植物和微不同生理状态直接影响到细胞壁的结构,对数生长生物细胞的细胞融合实际上就是原生质体融合。原期细菌的细胞壁中肽聚糖含量最低,细胞壁对酶的生质体融合具有其独到的优势。融合时细胞去除了作用最敏感,但是对数生长早期的菌相对较为脆弱,细胞壁,原生质体膜易于融合,没有
6、极性,相互融合受酶的过度作用会影响原生质体的再生率。研究表的是整个胞质与细胞核,保持了遗传物质传递的完明,使用微生物产生的酶复合物或商品酶的混合液[7][8]整性,易于得到杂种。此项技术能把亲缘关系比较比单独使用一种酶的效果好。陈海昌等证明,远,甚至毫无关系的生物体细胞融合在一起,为远缘在一定范围内,酶作用的时间、浓度都与原生质体的杂交架起了桥梁,是改造细胞遗传物质的有力手段,形成率成正相关,而与再生率成负相关。林红雨[9]它不仅在于打破了有性杂交重组基因创造新种的界等采用酶解10min后补加EDTA,改变酶解环境限,更重要的是扩大了遗传物质的重组范围。科技中的离子强度和渗透压,可
7、以提高原生质体形成率。[1～5]工作者经过大量的努力,利用原生质体融合技另外,添加0.02mol/L镁离子或0.6mol/L的钾粒术在微生物育种上取得了大量的成绩。事实证明,子,有利于原生质体的稳定,提高原生质体的产[10]原生质体融合是一项行之有效的微生物育种技术。量。1原生质体制备及其影响因素2原生质体融合的促融方法微生物细胞一般是有细胞壁的,因此原生质体由于在自然条件下,原生质体发生融合的频率融合的第一步就是制备原生质体。当前去除细胞壁非常低,所以在实际育种过程
