厄洛替尼时辰给药对肺癌模型裸鼠的抑瘤作用及作用机制

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1、·234·中国药理学与毒理学杂志2015年4月第29卷第2期ChinJPharmacolToxicol，Vol29，No2，Apr2015厄洛替尼时辰给药对肺癌模型裸鼠的抑瘤作用及作用机制12112林萍萍，李明春，刘亮，刘宁，刘博(1．青岛大学医学院药理学系，山东青岛266071;2．解放军第401医院药剂科，山东青岛266071)摘要:目的探讨厄洛替尼按时辰给药对肺癌裸鼠模型的抑瘤作用及其可能的作用机制。方法制备HCC827人肺癌细胞皮下移植瘤裸鼠模型，并随机分为6个厄洛替尼组和模型组，每组10只。厄洛替尼组－1分别在08:00，12:00，16:00，20:00，24:00及次日04:

2、00ig给予厄洛替尼5mg·kg，模型组给予与厄洛替尼组等体积分数的溶剂磺丁基醚-β-环糊精溶液。测量21d内裸鼠肿瘤体积变化，处死裸鼠后剥离肿瘤并称量其质量，实时荧光定量PCR和Western蛋白印迹法检测肿瘤组织中表皮生长因子受体(EGFR)及其下游信号转导通路分子丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)以及细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子1A(P21Waf1)的mRNA和相关蛋白表达水平。结果与模型组比较，厄洛替尼08:00和次日04:00组肿瘤体积显著缩小(P＜0．05);厄洛替尼08:00，12:00和次日04:00组肿瘤质量显著降低(P＜0．05)。与20:00组〔(0．70±0．36)g〕

3、比较，08:00〔(0．30±0．17)g〕和次日04:00〔(0．39±0．29)g〕组裸鼠肿瘤质量显著降低(P＜0．05)。08:00组裸鼠肿瘤组织中EGFR和MAPK的mRNA表达水平显著低于20:00组(P＜0．05)，而P21Waf1mRNA表达水平显著高于模型组(P＜0．05)。厄洛替尼08:00和次日04:00组p-EGFR和p-MAPK蛋白表达显著低于模型组(P＜0．05)。结论厄洛替尼时辰给药对裸鼠移植肺癌的抗肿瘤作用具有时辰节律性，08:00给药组效果最佳，其作用机制可能与EGFR/MAPK/P21Waf1信号转导通路有关。关键词:厄洛替尼;时辰化疗;昼夜节律;信号转导

4、途径;表皮生长因子中图分类号:R96，R979．1文献标志码:A文章编号:1000-3002(2015)02-0234-06DOI:10．3867/j．issn．1000-3002．2015．02．008近年来，随着个体化药物治疗的不断发展，小分厄洛替尼对EGFR突变型NSCLC疗效最为显［9］子靶向治疗药物逐渐成为抗肿瘤领域的研究热点。著，因而本研究采用EGFR突变型细胞HCC827盐酸厄洛替尼(erlotinibhydrochloride)是一种选择皮下种植造模。根据小鼠昼夜节律特点及其他时辰［10－11］性表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactor药理学研究选取6个

5、时辰点，根据药物对裸鼠receptor，EGFR)酪氨酸激酶抑制剂，对EGFR突变的半数有效量和预实验结果，选取药效最佳剂量－1型非小细胞肺癌(non-small-celllungcancer，5mg·kg，通过探究盐酸厄洛替尼对肺癌移植瘤［1］NSCLC)患者有显著疗效。生物体的昼夜节律变裸鼠的时辰药理学作用及其可能的分子机制，为临化影响着抗肿瘤药物的功效与毒性，很多药物在不床合理应用厄洛替尼提供依据。［2］同时间给药获得的效果不同。时辰治疗是在1d中选择合适的时间给药、使药物功效最大化而毒性1材料与方法最小从而提高治疗效果并减少不良反应的一种治疗［3－4］1．1试剂方案。昼夜节律调节着

6、大多数哺乳动物的生理RPMI1640培养基(批号:NYL1029，规格:功能和行为活动，随着对其分子机制及下游信号通500mL)、胰蛋白酶(批号:J130049，规格:路的深入认知，如何更有效地利用现有药物日渐成［5－6］100mL)、胎牛血清(批号:NYE0873，规格:为研究热点。目前，已发现多种细胞毒性抗肿［7－8］500mL)和青霉素/链霉素双抗(批号:J130043，规瘤药物具有时辰药理学效应，但小分子靶向药格:100mL)均购自美国HyClone公司;盐酸厄洛物的时辰药理学研究较少见。替尼片(商品名:特罗凯，意大利RocheS．p．A．公司作者简介:林萍萍，女，硕士研究生，主要

7、从事药理学生产，规格:每片含厄洛替尼150mg，产品批号:研究。M1028);RNAisoPlus(批号:AKA105)、cDNA提通讯作者:李明春，Tel:(0531)51870086，E-mail:取试剂盒(批号:AK2501)和RNA扩增试剂盒(批lmc401y@163．com号:AK5305)均购自大连TaKaRa公司。中国药理学与毒理学杂志2015年4月第29卷第2期ChinJPharmacolToxicol，