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1、视神经脊髓炎患者血清胶质纤维酸性蛋白的表达及临床意义［摘要］目的通过检测视神经脊髓炎(neuromyelitisoptic,NMO)患者与健康人的血清神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平，研究GFAP水平与NMO之间的关系。方法收集2013年6月〜2015年4月的NMO患者27例和27例健康人的血清，采用酶联免疫吸附剂法(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)检测样品吸光度，计算出GFAP的浓度。结果NMO患者组的血清GFAP浓度高于对照组，差异具有统计学意义(P0.05),具有可比性
2、1.2NMO患者诊断标准(1)年龄15-60岁;(2)均符合2007年Wingerchuk制定的NMO诊断标准［4,5］o必要条件：视神经炎与急性
3、=
4、脊髓炎。支持条件：脊髓MRI表现异常，病灶累及超过3个椎体节段；头颅MRI不符合多发性硬化诊断标准；血清NMO-IgG阳性。如果必要条件全部符合，再加上支持条件中的2条，即可确诊为NMO。1.3排除标准(1)曾患有脑卒中;(2)曾患有脑星形细胞瘤；(3)近期感染、组织损伤；(4)其他自身免疫性疾病1.4方法1.4.1样本采集空腹采集肘部静脉血5mL,存放于EDTA促凝试管
5、中，之后置49冰箱2h，等待血液凝固上下分层后，放到高速离心机中，3000rpm,离心5min,吸取上层血清，使用移液器将血清移到2mL试管中，冰箱内储存备用1.4.2主要实验试剂和仪器神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）酶联免疫试剂盒（CUSABIOBIOTECH公司常温离心机（Eppendorf公司美国）微量移液器（Eppendorf公司，美国），METERTECM5960酶标仪（上海医疗器械七厂），BD-132冰箱（海尔公司，青岛），379细胞培养箱（ShelLab,美国）1.4.3ELISA检测步骤从冰箱取岀GFA
6、P抗体ELISA试剂盒，置室温30mino准备标准品：在标准品中加入150pL的稀释液，调整到20ng/L浓度，然后倍比稀释，分别稀释为5个浓度"200ng/L、600ng/L、300ng/L、150ng/L.75ng/Lo将标准品和血清样品各稀释5倍，每孔加40pL的稀释液，然后加入10pL样品，均匀振荡。用封板膜密封后，379孵育30mino揭开封板膜,去掉液体，甩干，每孔加入洗涤液，放置30s后弃掉，反复洗涤5次，干燥。每孔（空白孔除外）加入酶标试剂50pLo再次进行之前步骤。每孔依次加入显色剂A、B各50pL摇匀
7、后避光显色20mino每孔加入终止液50pL,终止反应。设置空白孔为0.450nm波长依序测量各孔吸光度(OD值)1.4.4结果分析制作标准曲线y=1352.3x-426.34,根据各个样品的OD值代入标准曲线方程，测得各个样品的浓度1.5统计学方法实验数据通过SPSS19.0统计学软件进行统计分析，计量资料飒x±s癢示组间比较采用t检验检验水准g0.05,P[4]WingerchukDM,LennonVA,LucchinettiCF,etal.Thespectrumofneuromyelitisoptica[J],La
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