视神经切断后大鼠视网膜胶质原纤维酸性蛋白、波形蛋白和谷氨酰胺合成酶的表达变化

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1、中南大学硕士学位论文视神经切断后大鼠视网膜胶质原纤维酸性蛋白、波形蛋白和谷氨酰胺合成酶的表达变化姓名：张恩东申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：罗学港20050501摘要视神经切断后，大量的节细胞出现逆行性溃变和死亡，节细胞的丢失又能引起视网膜内逆行性的跨突触损伤。为阐明视网膜Mtlller细胞和星形胶质细胞在这一跨突触损伤中可能的改变和作用，我们利用右侧视神经切断的模型，检测了视网膜内谷氨酰胺合成酶(GS)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)以及波形蛋白(vimentin)的表达变化。取成年健康雄性sD大鼠48只随机分

2、为正常组、假手术组和手术组。手术组动物行右侧视神经眶内切断术，动物存活3、5、7、14、21、28天，免疫组织化学染色法检测各组中GS的表达变化：免疫荧光双标法结合Hoechst复染检测各组中GFAP和vimentin的变化。结果显示：1．在正常视网膜，GS免疫阳性产物主要见于MUller细胞胞体内。视神经切断后5天开始，Gs免疫阳性产物表达开始上升，7和14天时达到高峰，2l天开始下调，到28天时基本趋于稳定，但仍较正常组为高；其表达上调的出现也存在时空顺序，首先是节细胞层，其次是内网层，最后是外网层和外核层。2．在正常组

3、，GFAP仅在内网层表达。视神经切断后，GFAP在内网层表达明显增加，并在外网层和外核层出现表达，在节细胞层GFAP和Hoechst双标的阳性细胞数和总的细胞数之比也明显增加。3．在正常组，vimentin表达于视网膜的内网层、内核层、外网层和外核层，视神经切断后，vimentin的表达虽未见明显变化，但与GFAP荧光结果叠加时，可见外网层和外核层中两者共表达的产物明显增加，并可见一些胞体位于内网层的vimentin和GFAP双标阳性细胞。这些结果提示：视神经切断后，视网膜Mailer细胞和星形胶质细胞出现不同程度的活化。M

4、Uller细胞通过上调Gs的表达对视网膜神经元的存活起到一定的调节作用。此外，少数MUller细胞向内网层的移位，提示MUller细胞还可能通过其他途径参与视网膜损伤后的修复过程。关键词：视神经切断，胶质细胞，胶质原纤维酸性蛋白，波形蛋白，谷氨酰胺合成酶I【ABSTRACTRetrogradesynapticinjurywasinducedbymajoritydeathofretinalganglioncellswhichwascausedbyopticnerveaxotomy(ONA)．Sinceretinalglialc

5、ellshadastrongregulationofretinalsynaptictransmission，itisofgreatsignificancetoinvestigatethepossiblechangesandrolesofretinalMUllercellsandastrocytesduringtheinjury．Here，wedetectedchangesintheexpressionofglialfibrillaryacidicprotein(GFAP)，vimentinandglutaminesynthe

6、tase(GS)intheratretinafollowingONA．Forty—eightadult，healthy,maleSDratswererandomlydevidedintothreegroups：control，sham—operationandoperationgroups．Theratsintheoperationgroupwereappliedwithrightopticnervetransectionintraorbitallyandlefttosurvive3,5，7，14，21and28days，r

7、espectively．Allanimalswerekilledandeyeballswereexcisedandsectioned．ThesesectionswerestainedwiththeimmunohistochemistryofGSandimmunofluorescenceofGFAPandvimentin．Ourresultsshowedthat1．Incontrolretina，theexpressionofGSwasmainlylocalizedinMUllercellbodies．Comparedtoth

8、econtrolgroup，GSimmunohistochemicalstainingbegantoincreaseonthe5血day,reacheditspeakonthe1mand14血day,thendeclinedonthe21“dayandnearlybecamestableo