资源描述：
《酵母蔗糖酶的提取方法_李楠》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第26卷第4期食品与生物技术学报Vol.26No.42007年7月JournalofFoodScienceandBiotechnologyJul.2007文章编号:1673-1689(2007)04-0083-05酵母蔗糖酶的提取方法李楠,庄苏星,丁益(南京大学生命科学学院,医药生物技术国家重点实验室,江苏南京210093)摘要:采用甲苯自溶法、冻融法、SDS抽提法3种方法从酵母中提取蔗糖酶,经质量分数50%的乙醇分级沉淀﹑MonoQ阴离子交换柱层析纯化后,制得高纯度的酵母蔗糖酶。比较了上述3种提取方法并对该酶的部分性质进行了研究。纯化的酶经等
2、电聚焦测定,等电点为5.6,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为60kD。以蔗糖为底物测得酵母蔗糖酶的表观米氏常数Km为0.013mol/L。结果显示3种提取方法各有优劣,冻融法和SDS抽提法的提取效率远高于传统的甲苯自溶法。其中SDS抽提法的效率最高,加之其操作简便,更适合于酵母蔗糖酶大规模的制备提取。关键词:酵母;蔗糖酶;提取;纯化中图分类号:Q556.2;TS201.25文献标识码:AStudyonPurificationofInvertasefromYeastLINan,ZHUANGSu-xing,DINGYi(SchoolofLife
3、Sciences,StateKeyLaboratoryofPharmaceuticalBiotechnology,NanjingUniversity,Nanjing210093,China)Abstract:Thispaperusedthreemethodstoextractinvertasefromyeast,whichincludedinthismanuscript,threedifferentextractionmethodbreakingcellsbyaddingmethylbenzene,frostgrinding,andadding
4、SDSforextractinginvertasefromyeastwereinvestigated.Thenthepurifiedinvertasewasobtainedbyprecipitatationwith50%ethylalcoholandMonoQchromatography.Themolecularweightoftheenzymewas60kDbySDS-PAGE,andthepIwas5.6byisoelectricfocusing.TheinvertasefollowedtypicalMichaelis-MentenKine
5、ticswithapparentKmof0.013mol/L.Theresultsshowedallthreemethodshadbothadvantagesanddisadvantages.TheinvertaseextractedbyaddingSDSandfrostgrindinghadmuchmoretotalactivitythanthatofextractedbyaddingmethylbenzene.AhighesttotalinvertaseactivitywasfoundintheSDSextractionprocess,an
6、ditwasaconvenientandeconomicalmethodforcommericalproductionofinvertasefromyeast.Keywords:yeast;invertase;extraction;purification蔗糖酶(Sucrase,EC3.2.1.26)又称转化酶糖的1.36～1.60倍,在工业上具有较高的经济价[1](Invertase)。可作用于β-1,2糖苷键,将蔗糖水解值。可用以转化蔗糖,增加甜味,制造人造蜂蜜,为D-葡萄糖和D-果糖。由于果糖甜度高,约为蔗防止高浓度糖浆中的蔗糖析出,制造
7、含果糖和巧克收稿日期:2006-10-16.作者简介:李楠(1982-),女,山西太原人,生物化学与分子生物学硕士研究生.通讯作者:丁益(1954-),男,江苏南京人,教授,主要从事生物化学与分子生物学的研究.Email:yding@nju.edu.cn84食品与生物技术学报第26卷力的软心糖,还可为果葡糖浆的工业化生产提供新1.7粗酶制备[2]的方法。1.7.1甲苯自溶法称取酵母10g,加入20mL目前关于酵母中蔗糖酶提取纯化方面的研究双蒸水使其溶解,加入2.4gNaAc和4.5mL甲[1-8]较多,以甲苯自溶法最为常见。作者采用甲苯苯,摇床
8、振荡10min,37℃恒温水浴69h。再加入自溶法、冻融法、SDS抽提法3种不同的方法从酵4.8mL4mol/L的HAc和15mL双蒸水,调pH母中提
