酵母蔗糖酶的提取工艺

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1、酵母蔗糖酶的提取工艺摘要蔗糖酶是一种水解酶,广泛存在于动物、植物、微生物等各种生物体内。它可以不可逆的催化蔗糖水解为D-葡萄糖和D-果糖，为微生物的生长提供碳源和能源。采用甲苯自溶法、冻融法、SDS抽提法3种方法从酵母中提取蔗糖酶[1]，冻融法和SDS抽提法的提取效率远高于传统的甲苯自溶法。其中冻融法的效率最高（纯化倍数比活力与总活力），加之其操作简便，更适合于酵母蔗糖酶大规模的制备提取。比较了乙醇分级沉淀、硫酸铵分级沉淀对于冻融法得到的粗提物的沉淀效果，结果表明：50%(w/w)乙醇分级沉淀效果较好（比活力与总活力），乙醇分级沉淀所得蔗糖酶经DEAE-

2、Sepharose离子交换层析纯化后，制得高纯度的酵母蔗糖酶（比活力与总活力）。纯化倍数为16.14倍，比活性为947.805U/mg，回收率为51.6%。蔗糖酶的酶促动力学性质表明，蔗糖酶的最适PH值为4.5，最适温度为50℃，酶的特征米氏常数Km值为13.8mmol/L，最大反应速度Vmax为5.98ug/min。关键词：酵母；蔗糖酶；提取；纯化StudyonPurificationofInvertasefromYeastAbstractSucraseiswidespreadinprokaryotesandeukaryotes.Sucrasecata

3、lyzestheirreversiblehydrolysisofsucroseintoglucoseandfructose.themainfromsofcarbonandenergysuppliesinmicroorganismgrowthanddevelopment.Thispaperusedthreemethodstoextractinvertasefromyeast,whichincludedinthismanuscript,threedifferentextractionmethodbreakingcellsbyaddingmethylbenze

4、ne,frostgrinding,andaddingSDSforextractinginvertasefromyeastwereinvestigated.Thenthepurifiedinvertasewasobtainedbyprecipitatationwith50%ethylalcohol、sequentialammoniumsulpateprecipitationandDEAE-Sepharoselon-exchangechromatography.ThepurifiedsucrasewascharacterizedbySDS-PAGE.Ther

5、esultsshowedallthreemethodshadbothadvantagesanddisadvantages.TheinvertaseextractedbyaddingSDSandfrostgrindinghadmuchmoretotalactivitythanthatofextractedbyaddingmethylbenzene.Ahighesttotalinvertaseactivitywasfoundintheforstgrinding,anditwasaconventandeconomicalmethodforcommercialp

6、roductionofinvertasefromyeast.Theresultsofourstudywerefollowed:1、PurificationofinvertasefromyeastThespecificactivitywas947.805U/mg,purificationfoldwas32.28.Theactivityrecoveryofsucrasewas51.6%.2、PropertiesofsucraseThekineticcharactersoftheenzymehavebeenstudied.TheoptimumPHandopti

7、mumtemperaturefortheenzymearePH4.5and50℃.Kmis21mmol/LandVmaxis6.57ug/min.Keywords:yeast;invertase;extraction;purification第一部分文献综述蔗糖酶（Sucrase,EC3.2.1.26）又称转化酶（Invertase），是将蔗糖水解成D-葡萄糖和D-果糖的ß-D-果糖苷酶的一种。除广泛分布于微生物、植物外，类似的活性也在动物的消化液中发现。传统的酵母蔗糖酶的提取方法是甲苯自溶法，尽管此方法所用试剂简单、价格低廉，但由于其消耗时间长、重复性

8、差、酶活性较低等缺陷，现已很少采用。目前也有采用乙醇沉淀法和硫酸铵分级沉淀法制得