断裂剂加入顺序对DNA交联检测的影响.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiA．Sci．2013，41(7)：2848—2849，2856责任编辑朱琼琼责任校对卢瑶断裂剂加入顺序对DNA交联检测的影响赵琳娜，陈薛钗，钟艳艳，侯庆霞，钟儒刚(北京工业大学生命科学与生物工程学院，北京100124)摘要[目的]探讨单细胞凝胶电泳技术在检测DNA交联时断裂剂加入顺序及剂量对检测结果的影响。[方法]采用抗肿瘤药物卡莫司汀(BCNU)作为DNA交联剂，对DNA断裂剂过氧化叔丁醇(tBHP)的加入顺序和最佳使用剂量进行分析。将DNA拖尾长度作为检测指标，并采用检验分析。[结果]BCNU染毒前加入tBHP组与BCN

2、U染毒后加入tBHP组相比，统计学上均无显著差异。此外，随着tB—HP浓度的增加，DNA断裂程度随之增加，且在4OOtzmo1．／L时断裂效果非常显著。[结论]断裂剂tBHP的加入顺序不会对DNA交联检测的试验结果产生影响；tBHP在浓度为400txmol／L时断裂效果非常显著。关键词单细胞凝胶电泳；DNA交联；过氧化叔丁醇；卡莫司汀中图分类号S188文献标识码A文章编号0517—6611(2013)07—02848—02EfI_ect0fDifrerentBreakingAgentsExposedOrderonDNACrosslinkingDetectionZHA

3、0Lin-naetal(CollegeofLifeScienceandBioengineering，BeijingUniversityofTechnology，Beijing100124)Abstractl0biectivelrheaimwastodeterminewhethertheconcentrationandadditionsequenceofDNAbreakingagenthaveeffectonDNAcrosslinkingdetectioninSingleCellGelEctrophoresis(SCGE)．1MethodlCarmustine(BCN

4、U)，atumordrug，wasusedasDNAcrosslink—ingagent，andtert—butylhydroperoxide(tBHP)asDNAbreakingagent．TheeffeetofadditionsequenceandconcentrationoftBHPonBCNUDNAcrosslinkingwasassessedbytheTail—lengthinSCGE．T．testwasperformedtoindicatestatisticalsignificance．1Resuhl卟erewasnosignificantdiffere

5、ncebetweenthetBHPpre—treatmentandpost—treatmentintail—length．Moreover．theDNAfracturewasincreasedwiththeriseoftBHPconcentration．and400LLmo1／LshowedamarkedDNAbreakingeffect．1ConclusionltBHPadditionsequencehasnoefectonDNAcrosslinkingdetection，andconcentration400I．Lmo1／LwasthebestdoseinDNA

6、breaking．KeywordsSinglecellgelelectrophoresis；DNAcross．1inking；tBHP：BCNUDNA交联是一种非常严重的DNA损伤，它的存在会阻BCNU染毒前加入断裂剂tBHP组和在BCNU染毒后加入断滞DNA链正常的解旋，进而阻止其转录和复制，从而导致染裂剂tBHP组的DNA交联结果，分析两组之间的差异。色体断裂、缺失、基因突变和癌变。多种致癌物和抗肿瘤药1材料与方法物都会引起DNA交联，如砷、镍、铬、顺铂、丝裂霉素C、N一1．1试剂和仪器小鼠胚胎细胞株NIH／3T3，购于北京协和亚硝基脲类化合物等，因此检测DNA

7、交联对于测试外源化医学院基础学院细胞资源中心；DMEM培养液和胎牛血清购于学物潜在的遗传危害和致癌性以及探究治疗癌症的机理有Hyclone公司；卡莫司汀(BCNU)、二甲基亚砜(DMSO)、低熔点着极其重要的意义。琼脂糖(LMA)、胰蛋白酶购于Sigma公司；正常熔点琼脂糖检测DNA交联的方法有很多，常用的有碱洗脱法⋯、琼(NMA)购于上海YITOBIO—INSTRUMENT公司；过氧化叔丁脂糖凝胶电泳法。、荧光法、抗体检测法、高效液相色醇(tBHP)购于国药集团化学试剂有限公司；gel—red荧光核酸谱一质谱联用技术。但这些方法中有些耗时、昂贵、操作染色试剂为