苯并芘对褐菖鲉肝细胞DNA交联的影响.pdf

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1、第29卷第4期2010年11月台湾海峡JOURNALOFOCEANOGRAPHYINTAIWANSTRAITV01．29，No．4Nov．。2010苯并芘对褐菖鲇肝细胞DNA交联的影响张景智1，陈荣1’2，李东晓1(1．厦门大学海洋与环境学院近海海洋环境国家重点实验室，福建厦门361005；2．厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞丁程教育部重点实验室，福建厦门361005)摘要：以褐菖鱼由(Sebastiscusmarmoratus)为实验材料，设定苯并芘[B(a)P]的注射剂量梯度分别为O．00、O．05、O．50、5．00ms／kg，分别于实验的第O、3、6天时每一条鱼进行腹腔注射

2、，于第1、4、7天取样，测定胆汁中的B(a)P及其代谢物含量．采用荧光检测法检测B(a)P染毒后褐菖妯肝细胞DNA—DNA交联(ooc)交联系数的变化，并用KCI．SDS沉淀法检测DNA．蛋白质交联(DPC)交联系数的变化．结果表明：(1)经注射染毒后鱼体胆汁中的B(a)P及其代谢物含量蓄积程度存在着明显的剂量效应和时间效应；(2)B(a)P的注射剂量分别为0．05、0．50ms／kg时各时间点褐菖鲇肝细胞DDC交联系数均无显著增大(P>0．05)，在5．00ms／kg剂量组，随着时间延长DDC交联系数逐渐增大，第4天即有显著差异(p

3、)；(3)B(a)P诱导DPC的趋势与DDC类似，但0．5ms／kg剂量组在第7天DPC交联系数即出现显著增大(P<0．05)．这表明B(a)P对DPC的诱导高于DDC．这为进一步研究B(a)P的遗传毒性提供了依据，并为探讨B(a)P致癌的作用机理提供了新的信息．关键词：海洋生物学；生物毒理；DNA—DNA交联；DNA一蛋白质交联；苯并芘；褐菖鲇DOI：10．3969／J．ISSN．1000．8160．2010．04．002中图分类号：P735文献标识码：A文章编号：1000—8160(2010)04—0446．06苯并芘[B(a)P]是1种具有强致癌性的多环芳烃(polyey

4、elicaromatichydrocarbons，PAHs)，被国际癌症研究机构(IARC)列为第2类A组人类致癌物⋯．B(a)P在环境中广泛存在，且对鱼类具有毒性作用．Paehe．CO等(2002)的研究表明B(a)P会在欧洲鳗鲡(AnguillaanguiUa)胆汁内蓄积，并可造成肝脏细胞的萎缩、组织坏死及点状炎症旧J．翁朝红等(2008)和Ribeiro等(2005)也分别发现B(a)P可以引起黑鲷(Spar獬mzlg?ro一唧玩沁)和欧洲鳗鲡肝组织的病理变化p。1．由于B(a)P的强致癌性，一些研究表明它也会引起鱼类DNA损伤，主要是DNA断链”1和形成DNA加合物旧1

5、．DNA交联是DNA损伤中的1种．DNA交联一般分为DNA一蛋白质交联(DNA．proteincros．1inks，DPC)和DNA—DNA交联(DNA—DNAerosslinks，DDC)2类．谢静芳等(2007)研究了S0，致小鼠肝细胞DNA-蛋白质交联作用，表明强致癌剂可以导致DNA交联作用¨J，而B(a)P是否可以引起哺乳类或者鱼类DNA交联目前文献报道比较少．本研究以海洋鱼类褐菖触(Sebastiscusmarmoratus)为实验对象，分别检测B(a)P染毒后致褐菖鼬肝细胞DDC和DPC交联系数的变化，为进一步研究B(a)P的遗传毒性提供依据，并为探讨B(a)P致癌

6、的作用机理提供新的信息．1材料与方法1．1材料B(a)P购自DeadSeaBromineGroup公司，纯度为99．9％；胰蛋白酶(typsin)购自上海生工生物工程有限公司；Tris、HEPES、小牛胸腺DNA标准液购自上海生物工程有限公司，由美国Amresco公司生产；十二烷基硫酸钠(SDS)购自Merk公司；蛋白酶K购自Merk公司；Hoechst33258购自SIGMA公司；SQTissueDNAKit试剂盒购自OMEGA公司；其他试剂如KCl、EDTA、KH：PO。、K：HPO。均为国产分析纯．美国瓦里安公司的收稿日期：2009—10-29基金项目：国家自然科学基金资

7、助项目(40776067)；厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室开放基金资助项目(2009104)作者简介：张景智(1983一)，男．硕士研究生；E．mail：gouzhil983@sohu．com通讯作者：陈荣(1974一)，男，副教授；E·mail：cllemmg@mU．edu．ell4期张景智等：苯并芘对褐菖鼬肝细胞DNA交联的影响·447·Cary．Eclipse型荧光分光光度计．实验用褐菖铀采集于福建厦门沿岸海域，体重为40～60g．1．2实验方法1．2．1染毒方法实验