正文描述:《中国荷斯坦牛bola-drb上游近端调控区序列分析》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、;8RuRn
2、匕农学报.2010,25(增-r,1):17.19BOREALI-SIHiC-一中国荷斯坦牛BOLA.DRB上游近端调控区序列分析王学清,王昆,吴占军,张峰,李魁英(河北省农林科学院粮油作物研究所,河北省农林科学院奶牛研究中心,河北石家庄050031)摘要:通过PCR扩增及DNA序列测定,得到了中国荷斯坦牛BOLA—DRB基因的5上游近端调控区(UP,a)序列。比较发现,与人、马以及羊的MHC.DRB基因的5URR类似,牛MHC-DRB基因5URR区同样存在与基因表达调控有关的高度保守的w、x、Y、CCAAT及类TA
3、TA调控元件,调控元件的组织结构也相同。关键词:BOLA.DRB5URR;MHC—DRB;调控元件中图分类号:Q78文献标识码:A文章编号:1000—7091(2010)增刊一0017—03NucleotideSequenceoftheUpstreamRegulatoryRegionofBoLA-DRBinChineseHolsteinWANGXue—qing,WANGKun,WUZhan-jun,ZHANGFeng,LIKui-ying(InstituteofCerealandOilCrops,HebeiAcademyofAgr
4、icultureandForestrySciences,DairyCattleResearchCenter,HebeiAcademyofAgricultureandForestrySciences,Shijiazhuang050031,China)Abstract:卟eDNAsequenceoftheproximalupstreamregulatoryregion(URR)oftheCattleMHCDRB(-LA一geneswasamplifiedusingPCR,alignmentofthesequencewiththoseo
5、fHLA—DRB(GQ345101,X64436,x86151),ELA—DRB(AF344426)andOvar—DRB(AF344426)showedthat:from5to3,ithashighlyconservese—quencemotifsinclude:W,X,Y,CCAATandTATA—likeregulatoryelements,theorganizationofthemwasthesametoo.Keywords:BoLA—DRB5’URR;MHC-DRB:RegulatoryelementsMHC即主要组织相
6、容性复合体(MajorHisto—Ⅱ类DRB基因上游调控区进行了克隆和测序,得到compatibilityComplex)是由紧密连锁的高度多态的了其核苷酸序列,为进一步研究中国荷斯坦牛MHC基因位点所组成的染色体上的一个区域,连锁于一启动子区的多态性奠定了基础。条染色体上的MHC基因构成一个单倍型,主要包括1材料和方法MHCI类基因、Ⅱ类基因和Ⅲ类基因-1-3]。由于MHC在机体的免疫应答调控和免疫识别过程中发1.1试验材料挥着重要的作用,而且与动物对疾病的易感性和抗荷斯坦奶牛全血。样品采自河北省农科院奶牛性存在密切的关系,因此
7、作为疾病抗性和易感性的中心奶牛试验站。候选基因,成为研究的热点l4J。MHC最主要的特点1.2基因组DNA的提取是具有高度的多态性,以往的许多研究都集中于采用常规的酚一氯仿抽提法提取基因组DNA。MHCI类基因和MHCII类基因外显子的多态性方用紫外分光光度计法和0.8%琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA的纯度,并估计其含量,稀释DNA样品面。但是根据近年来国外的研究报道以及我们自己至50ng/L。的初步研究结果,我们认为MHCII类基因近端调控1.3PCR引物设计及扩增条件区的多态性可能是MHC1I类分子产生高度多态的根据文献确定B
8、OLA—DRB基因的5上游近端调一种新机制I9。本试验对中国荷斯坦牛的MHC收稿日期:2010—03—20基金项目:河北省自然科学基金项目(C2009001308);河北省农林科学院财政项目(2010055008);河北省农林科学院青年基金项目(2009)资助作者简介:王学清(1981一),男,河北平山人,助理研究员,硕士,主要从事动物遗传育种研究。通讯作者:王昆(1974一),女,河北河间人,副研究员.博士,主要从事动物遗传育种研究。●CT-A0RIgULTURAE18华北农学报25卷90REIiLI-SIHICA控区(URR)
9、引物序列r。正向引物:5一TGTTI'C阳性克隆,用博大泰克质粒提取试剂盒提取重组质AGAAAAGGACCTTC-3;反向引物:5一GAGAAA粒DNA,随机挑取6个阳性克隆用M13F/R通用引TACAGACACACCATGC一3,PCR扩增体系为
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