s1p对缺氧_复氧诱导的共培养心肌细胞和成肌细胞损伤的影响

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1、第42卷第6期第637页华中科技大学学报(医学版)Vo1．42No．8P．6372013年12月ActaMedUnivSciTeehnolHuazhongDec．2O13SIP对缺氧／复氧诱导的共培养心肌细胞和成肌细胞损伤的影响*于欢，谷翔，张普华，徐良贤，陈培良，秦仲君，赵勇九江学院江西省系统生物医学重点实验室，九江332000。九江学院附属医院心内科，九江332000摘要：目的探讨1一磷酸神经鞘氨醇(sphingosine1一phosphate，S1P)对联合培养的大鼠骨骼肌成肌细胞及新生大鼠心肌细胞缺氧／复氧所致细胞损伤

2、的影响。方法体外分离与培养新生大鼠心肌细胞，并与大鼠骨骼肌成肌细胞共同培养，构建缺氧／复氧损伤模型，于复氧期开始给予SIP干预。利用2，4二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(1actatedehy—drogenase，LDH)活性，硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛(maleicdialdehyde，MDA)含量，原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡，并比较各组间差异，从而观察SIP对共同培养新生大鼠心肌细胞和大鼠骨骼肌成肌细胞缺氧／复氧诱导细胞损伤的影响。结果①新生大鼠心肌细胞在培养24h后开始贴壁生长，培养6d内细胞数量未见明显

3、变化，培养2d后倒置显微镜下见散在的具有搏动能力的心肌细胞，第3天可见散在的心肌细胞相互间连接成合胞且可见细胞搏动，4～5d呈同一节律的搏动。②100、500、1000nmol／LSIP均可减少共培养心肌细胞和骨骼肌成肌细胞缺氧／复氧损伤后LDH活性和MDA含量，即可减轻复氧所诱导的细胞损伤。③SIP可抑制共培养心肌细胞和骨骼肌成肌细胞缺氧／复氧损伤后的细胞凋亡。结论SIP可减少因复氧所诱导的共同培养细胞损伤，抑制细胞凋亡。关键词：1一磷酸神经鞘氨醇；骨骼肌成肌细胞；心肌细胞；缺氧／复氧；细胞凋亡中图分类号：R363DOI：1

4、0．3870／j．issn．1672—0741．2013．06．003EffectsofS1PonAn0xia／Reoxygenati0nInjuryinCo—culturedCardiomyocytesandMyoblastsYuHuan，GuXiang，ZhangPuhuaetalLTheKeyLaboratoryofSystemBio—medicineo{Jiangxi，JiujiangUniversity，Jiujiang332000，China。DepartmentofCardiology，TheAffiliated

5、HospitalofJiujiangUniversity，Jiiang332000，ChinaAbstractObjectiveToexploretheeffectsofsphingosine1phosphate(S1P)ontheanoxia／reoxygenation(A／R)injuryinco—culturedratskeleta1myoblastsandneonatalratcardiomyocytes．MethodsTheneonatalratcardiomyocyteswereisolatedivitroandc

6、ultured．Theywerethenco—culturedwithratskeleta1myoblasts．TheA／RinjurymodelwasestablishedandS1Pwasgivenatthebeginningofthereoxygenation．Theactivityofiactatedehydrogenase(LDH)andthecontentofmaleicdialdehyde(MDA)weremeasuredbyusingspectrophotometricprocedures．Apoptosiso

7、fcellswasassessedbvTUNELassay．TheeffectsofS1PontheA／Rinjuryinco—culturedcellswereexamined．Results①Theneonata1ratcardiocmyocytesbegantoadhereaf—ter24hofculture．Theeel1numberexperiencednosignificantchangewithin6daysofculture．Beatingcardiomyocytesweresparselyseenafter2

8、daysofcultureundertheinversemicroscope．Thedispersecardiomyocyteswereconnectedonthe3rddayandbeatonthesamerhythmat4—5days．②S1P(100，500and100