黑素皮质素受体4基因多态性及与肌内脂肪含量相关性研究

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1、云南畜牧兽医(2olo年第2期)厂I试——]验Il研究I黑素皮质素受体4基因多态性及与-．_-___-_-__-．-___一肌内脂肪含量相关性研究王卉。郭雷，高士争(云南农业大学云南省动物营养与饲料重点实验室，云南昆明650201)摘要：利用PcR一聊技术检测75头鸟金猪和41头长白猪黑素皮质素受体4(MC4R)基因的第7跨膜结构功能域D298N主效位点的遗传变异，并用最小二乘法模型分析MC4R基因对猪肌内脂肪含量的遗传效应。结果：鸟金猪和长白猪MC4R基因第7跨膜结构功能域raqI—RFLP位点均存在多态性，基因型为从、Aa和a8。长白猪从基因型肌内脂肪含量高于Aa和aa基因型，但差

2、异不显著(P>0．05)；从基因型对PCR一咖的最小二乘值最大，证明该基因在该位点对肌内脂肪(IMF)含量的效应值最大。鸟金猪肌内脂肪含量aa基因型显著高于从和Aa基因型(P<0．05)，aa基因型对PCR—RFLP的最小二乘值最大，证明该基因在该位点对IMF含量的效应值最大。提示，鸟金猪和长白猪的MC4R基因对肌内脂肪的调控是由不同的基因型所控制的。鸟金猪可通过提高MC4R基因蛆基因型的频率来增加肌内脂肪含量，达到改善鸟金猪猪肉品质的目的。关键词：肌内脂肪(IMF)；黑素皮质素受体4(MC4R)；多态性；鸟金猪中图分类号：S828．892文献标识码：A文章编号：1005—1341(2

3、010)02—0001一o3黑素皮质素受体4(MC4R)是下丘脑腹内核分泌的一类生工生物工程技术服务有限公司合成)J，引物序列及PER肽类物质，它是G一蛋白耦联受体(G—proteincoupledrecap．产物大小见表1。PER扩增反应体系均为25，其中含有约tora，GPC~)超家族的一个成员J。猪MC4R基因定位于l50ng基因组DNA，10pmd的引物，200izmol／L的dNrPs，号染色体q22—27处J，与微卫星标记S03113和S0082紧1．5mmol／L的MgC12，2．0UTaq酶。扩增条件为：样品经密连锁J。自猪MC4R基因克隆以来，学者们对其进行了大94℃

4、变性3rain后，按照下列程序进行扩增。94℃变性量的研究，寻找突变位点，确定突变与体重及脂肪性状的相1min，59．4℃退火1rain，72'E延伸1min，36个循环后，72℃关性。序列分析表明在猪MCAR基因第7跨膜结构功能域延伸10rain。的一个高度保守区内发生了错义突变(c—A)，由此产生了表1MCAR基因的PER一腓引物序列以及TaqI酶切位点的改变，PCR—RFLP分析显示该突变与背相应的PCR产物大小膘厚及胸腰部、臀部平均边膘厚以及生长率和采食量显著相PEPER产物大小关。R：引物序列。RFLP⋯⋯／bp乌金猪是云南地方优良猪种，主要生长于云、贵,JII交界的金沙江流

5、域和乌蒙山区，具有耐粗饲、适应性强、肉质优I∞眦226laql5，ATAGCAACAGATGATCTCITI~良、肌内脂肪丰富、粗蛋白含量高，及纤维细密、肉质鲜嫩、味一一3，美等优良特性，是云南宣威火腿加工的主要原料。本试验以1．2．3限制性内切酶消化扩增产物以及电泳选用TaqI乌金猪为研究对象，采用“PER—RFLP”方法检测MCAR基内切酶酶切226bp的产物，酶切的反应体系为20，其中因不同位点的多态性，旨在寻找与肌内脂肪含量性状相关的扩增产物为17，限制性内切酶1u共3，65'E反应过遗传标记，并为我国独特的遗传资源——乌金猪种质特性的夜。酶切产物用2％的琼脂糖凝胶电泳分析。研

6、究打下分子生物学基础。1．3统计方法分析1材料和方法1．3．1基因频率和基因型频率计算1．1试验材料计算公式：Pi=[2(ii)+(ij1)+(ij2)+⋯+(ij．1)选用云南省地方品种乌金猪75头，长自猪41头，从猪(i．-1j)]／2n的前腔静脉采血15mL，ACD抗凝。屠宰后测定肌内脂肪含基因型频率=基因型个体数／测试群体总数量，供试猪饲养和营养条件完全一致。1．3．2MCAR基因与肌内脂肪相关性的分析采用SAS统1．2试验方法计分析软件对本试验的数据进行处理，分析不同MC4R基因1．2．1猪的基因组DNA提取从血液中提取DNA，方法参照《分子克隆实验指南》(第二版)。提取结果

7、见图l。型与肌内脂肪含量均值之间的关系。用线性模型分析MC4R基因对猪肌内脂肪含量的影响，所有资料根据该模型，计算1234567891011最小二乘均值和MC4R基因型的遗传效应。1．3．3基因频率和基因型频率的差异显著性检验采用X2独立性检验。2结果与分析图1乌金猪全血DNA电泳图2．1PER扩增结果1—6为乌金猪；7一ll为长白猪MC4R基因PER扩增产物长度为226bp，经1．5％琼脂1．2．2PER扩增引物参照KimKS等(2000)设