细胞与分子生物学.pdf

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1、细胞与分子生物学实验指导上海交通大学医学院细胞与分子生物学教学实验室2006.1编写说明将细胞生物学、生物化学与分子生物学、免疫学和遗传学的实验课整合成细胞与分子生物学教学实验课，构成了独立设置的课程，具有完整而系统的知识体系，以便于对学生进行实验技术的系统训练。本实验指导按照实验技术自身的特点，分成基础实验和综合实验二部分。基础实验以电泳技术、层析技术、离心技术、PCR技术、免疫学的微量淋巴细胞毒、ELISA和凝集试验为主线安排实验，同时以细胞学的细胞培养、显微镜使用和遗传学技术染色体制备分析作为其他基础实验，辅以教师的讲授和新技术的演示，形成新的细胞

2、与分子生物学实验教学特色。我们的目的：给于学生比较连贯的有关医学生物学的训练和实验指导。相信我们的努力能够促进学生的训练有助独立设课的进程。综合实验主要提高学生的实验操作水平和创新思维能力的培养并有意识地建立凋亡细胞的综合实验，是将细胞学技术、生物化学与分子生物学、免疫学实验技术融合一体，也可以视为对医学生物学实验教学的延伸，检视整合的教学效果。社会在发展，教学在改革，本实验指导难免有不够之处，敬请使用本教材者批评指正，以期进一步修改。细胞与分子生物学教学实验室2008.6课程的实验项目与学时数表教学实验时间安排一、基础实验83学时（一）电泳技术实验一血

3、清蛋白醋酸纤维簿膜电泳4学时实验二聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分离蛋白质5学时实验三血清脂蛋白琼脂糖电泳4学时（二）层析技术实验四凝胶柱层析分离鉴定蛋白质4学时实验五DNS-氨基酸的双向聚酰胺簿膜层析4学时实验六离子交换层析分离氨基酸4学时（三）离心技术实验七差速离心法从鼠肝中提取核糖核蛋白体和核蛋白体5学时RNA实验八蔗糖梯度离心法分部离心核糖核酸5学时（四）PCR体外扩增技术实验九逆转录PCR5学时实验十定量PCR4学时（示教）实验十一PCR单链构象多态性分析4学时（示教）（五）其他基本实验技术实验十二微量淋巴细胞毒试验3学时实验十三ELISA及Wes

4、ternblot技术6学时实验十四流式细胞术3学时（示教）实验十五细胞培养6学时实验十六显微镜使用3学时实验十七染色体分析8学时实验十八图象分析/电镜观察3学时（示教）实验十九凝集试验3学时二、综合实验49学时实验二十检测鼠肝肌动蛋白（ß-actin）基因20学时1．鼠肝DNA的制备2．PCR技术检测ß-actin基因3．琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段4．southern杂交鉴定DNA片段实验二十一兔肝碱性磷酸酶（AKP）的纯化及Km的测定20学时1．有机溶剂法部分纯化兔肝AKP2．AKP比活性测定3．DEAE纤维素（DE-52）离子交换层析进一步纯化AK

5、P4．AKPKm测定实验二十二凋亡检测9学时1．标本准备2．不同方法的凋亡检测共计132学时目录第一部分基础实验一电泳技术实验一血清蛋白醋酸纤维簿膜电泳实验二聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分离蛋白质实验三血清脂蛋白琼脂糖电泳二层析技术实验四凝胶柱层析分离鉴定蛋白质实验五DNS-氨基酸的双向聚酰胺簿膜层析实验六离子交换层析分离氨基酸三离心技术实验七差速离心法从鼠肝中提取核糖核蛋白体和核蛋白体RNA实验八蔗糖梯度离心法分部离心核糖核酸四PCR技术体外扩增实验九逆转录PCR实验十定量PCR实验十一PCR单链多态性分析五其他基本实验技术实验十二微量淋巴细胞毒试验实验

6、十三ELISA技术实验十四流式细胞术实验十五细胞培养实验十六显微镜使用实验十七染色体分析实验十八图象分析/电镜观察实验十九凝集试验第二部分综合实验实验二十检测鼠肝肌动蛋白（ß-actin）基因（一）鼠肝DNA的制备（二）PCR技术检测ß-actin基因（三）琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段（四）southern杂交鉴定DNA片段实验二十一兔肝碱性磷酸酶（AKP）的纯化及Km的测定（一）有机溶剂法部分纯化兔肝AKP（二）AKP比活性测定（三）DEAE纤维素（DE-52）离子交换层析进一步纯化AKP（四）AKPKm测定实验二十二凋亡检测（一）标本准备（二）不同方

7、法的凋亡检测教学实验学生须知：【教学内容】1.教学实验室规则，学生进入实验室注意事项。2.实验基本操作以及仪器设备的正规操作及维护3.实验预习、实验记录和实验报告【目的要求】掌握：1.实验的基本操作技能以及细胞与分子生物学实验的微量操作技能2.实验记录和实验报告3.实验的预习4.实验试剂的使用，防止试剂的交叉污染5.实验器材的清洁维护6.实验台的清洁与整理一、基础实验（一）电泳技术【教学内容】1.电泳技术是检测、鉴定各种生物大分子的纯度、含量及描述它们的特征，甚至还是分离、纯化、回收和浓缩样品的主要工具之一。2.电泳技术的发展及电泳技术的基本原理。电泳是

8、指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白