应用逆转录环介导等温扩增技术检测大豆种子中烟草环斑病毒-论文.pdf

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1、第3l卷第6期大豆科学Vol_31No．62012正12月SOYBEANSCIENCEDec．2012应用逆转录环介导等温扩增技术检测大豆种子中烟草环斑病毒郭立新，陈先锋，徐亚飞，邱志君，朱迪琦，段维军(1．北仑出入境检验检疫局，浙江宁波315800；2．宁波出入境检验检疫局，浙江宁波315012)摘要：根据烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白基因序列设计并合成了1组RT—LAMP引物，利用实时浊度仪监测反应过程，初步建立了烟草环斑病毒的RT—LAMP检测方法，并进行了特异性与灵敏度检测。结果显示，RT-LAMP灵敏

2、度与普通RT—PCR法相当，但检测时间明显缩短，1h即可完成反应。此外，体系中加入钙黄绿素，反应结束后，可通过裸眼观察荧光的有无来判断是否有扩增。对大豆种子中携带的烟草环斑病毒进行了RT—LAMP检测，裸眼判定与仪器监测结果一致。结果证明所建立的TRSVRT．LAMP方法具有快速、特异、灵敏，操作简单的特点，不需复杂仪器设备，适合于TRSV的现场快速检测。关键词：烟草环斑病毒；逆转录环介导等温扩增；检测中图分类号：$412文献标识码：A文章编号：1000-9841(2012)06-0980-04Detection

3、ofTobaccoRingspotVirusinSoybeanSeedsbytheReverseTranscrip-tionLoop-mediatedIsothermalAmplificationMethodGUOLi．xin，CHENXian．feng，XU．Ya．fei，QIUZhi—jun，ZHUDi．qi，DUANWei-jun(1．BeilunEntry-exitInspectionandQuarantineBureau，Ningbo315800，Zhejiang；2．NingboEntry—exitI

4、nspectionandQuarantineBureau，Ningbo315012，Zhejiang，China)Abstract：Asetsofprimersweredesignedandsynthesizedbasedonthecoatproteincodingregionoftobacconngspotvirus(TRSV)forreversetranscriptionloop·mediatedisothermalamplification(RT—LAMP)assay．Theamplificationwas

5、detectedu—singtherealtimeturbidimeter．AnacceleratedRT—LAMPprocedurewithonestepwasdevelopedforthedetectionofTRSV．ThespecificityandsensitivityoftheRT—LAMPassayweretested．RT—PCRcomparedtoRT-LAMPbyserialdilutionsoftotalRNAextracts，theyhadthesamesensitivities，butR

6、T—LAMPwasquicker，andthereactioncouldbefinishedwithin1hour．Inaddition，thepresenceorabsenceofthefluorescentdisplayindaylightallowednakedeasydetectionoftheamplificationofTRSVgenomicRNAusingCaleein．TheRT-LAMPassaywasappliedsuccessfullytodetectTRSVinsoybeanseeds，a

7、ndthere-suhbytheadditionofCaleeinwasconsistentwiththeresultdetectedbytherealtimeturbidimeter．Themethodisrapid，speeigic，sensitiveandsuitableforrapidfielddetectionofTRSV．Keywords：Tobaccoringspotvirus(TRSV)；Reversetranscriptionloop—mediatedisothermalamplificatio

8、n(RT—LAMP)；Detec—tiOn烟草环斑病毒(Tobaccoringspotvirus，TRSV)是plification，LAMP)技术未见有应用于检测TRSV的豇豆花叶病毒科(Comoviridae)线虫传多面体病毒报道。LAMP是一种新的核酸扩增技术，该技术依属(Nepovirus)的代表种J。该病毒分布于日本、韩赖于能够识别靶序列上6个特异区域的引物和一