晚期糖化终产物受体在小鼠急性肝损伤中的表达及意义-论文.pdf

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1、·116·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2012Feb；47(2)晚期糖化终产物受体在小鼠急性肝损伤中的表达及意义胡梅琮，胡涛，靳小可，黄大可，张梅，李群，胡春松，黄保军摘要目的探讨晚期糖化终产物受体(RAGE)在刀豆蛋STAT、MAPK)，促进靶细胞合成和分泌前炎症因子，白A(ConA)诱导的小鼠急性肝损伤中的表达及意义。方法增加炎性细胞黏附能力，诱导免疫细胞向炎症部位将72只昆明种小鼠随机分为对照(NS)组、ConA组，分别迁移，进而放大炎症反应J，在糖尿病、多发性硬化于注射后2、6、12、18、24、48h

2、眼球取血并留取肝脏标本，用症等多种疾病的发生发展中起着重要作用。刀豆蛋赖氏法检测血清中谷氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基白A(concanavalinA，ConA)是一种植物凝集素，小转移酶(AST)活力；HE染色法检查肝组织病理学改变；RT-鼠尾静脉注射后可引发急性肝损伤，其中炎性细胞PCR技术检测肝组织高迁移率族蛋白1(HMGB1)、RAGE、浸润及大量促炎因子释放是导致肝损伤的关键，但肿瘤坏死因子0【(TNF-仅)、白介素-1B(IL一1B)mRNA的表达；免疫组化法检测肝组织HMGB1蛋白的表达；WesternRAGE是否参与ConA诱导急性肝损伤进

3、程，目前尚blot法检测肝组织RAGE蛋白的表达；ELISA法检测血清中不清楚。本研究以ConA诱导的小鼠急性肝损伤为TNF．0l、IL-113含量。结果成功构建ConA诱导小鼠肝损伤模型，动态检测RAGE在肝损伤组织中的表达变模型；注射ConA2h肝组织中HMGB1mRNA表达即增加，化，同时验证了其配体HMGB1在受损肝组织中的至18h达峰值(P<0．01)；HMGB1蛋白表达明显聚集于坏释放，观察其与炎症细胞因子肿瘤坏死因子仅(TNF一死区域；肝组织RAGEmRNA于12h表达上调；RAGE蛋白仅)、白介素-1p(IL一1B)之间的关系，为进一步阐明的表达于

4、24h达到峰值，与NS组相比差异有统计学意义(P急性肝损伤发生的免疫学机制提供实验依据。<0．01)；肝组织TNF一mRNA表达分别在6、24h出现2个峰值，血清r．NF．含量在注射ConA2b达峰值(455．25．g／1材料与方法L)，随后逐渐减低，至48h与NS组相比无明显差异；注射ConA各时间点小鼠肝组织与血清中IL-1B水平均显著高于1．1实验动物昆明种小鼠72只，清洁级，7～9NS组(P<0．01)。结论在ConA诱导小鼠急性肝损伤模周龄，体重20—26g，雌雄各半，购自安徽医科大学型中，损伤肝组织RAGE的表达显著增加，这可能与诱导肝实验动物中心。组

5、织损伤中炎症因子的进一步产生有关。1．2主要试剂ConA购自美国Sigma公司；血清关键词刀豆蛋白A；肝损伤；高迁移率族蛋白1；晚期糖化谷氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶终产物受体；肿瘤坏死因子0l；白介素一1B(AST)检测试剂盒购自长春汇力生物技术有限公中图分类号R一332；R979．5；R392．11；R392．114；R575司；小鼠TNF-o【、IL．1BELISA检测试剂盒购自上海文献标识码A文章编号1000～1492(2012)02—0116—06森雄科技实业有限公司(美国R&D公司进口分装)；TRlzol试剂购自美国Invitrogen

6、公司；Rever—晚期糖化终产物受体(receptorofadvancedgly．tAid第一链cDNA合成试剂盒购自美国MBIFer．cationendproducts，RAGE)是免疫球蛋白超家族成mentas公司；TaqDNA聚合酶购自美国Promage公员之一，主要表达于单核／巨噬细胞、内皮细胞及一司；兔抗小鼠HMGB1抗体购自美国Bioworld公司；些肿瘤细胞表面J。其配体包括：高迁移率族蛋白sP-900O免疫组化染色试剂盒及浓缩型DAB试剂盒1(highmobilitygroupbox1，HMGB1)、钙粒蛋白家族购自北京中杉金桥公司；山羊抗人RAG

7、E抗体购自成员、晚期糖化终产物等。RAGE与配体结合能持美国R&D公司；HRP标记的兔抗山羊IgG二抗购续激活多条促炎症信号转导途径(如NF-KB、JAK一自北京中杉金桥公司。2011—09—08接收1．3方法基金项目：国家自然科学基金(编号：30972791)；安徽医科大学博士1．3．1ConA诱导小鼠急性肝损伤模型的制备及标科研基金(编号：XJ2006005)本采集参考文献建立ConA诱导的小鼠急性肝作者单位：安徽医科大学免疫学教研室、病原和免疫学实验室、损伤模型。取72只昆明鼠，随机分为两组：其中36基础医学院综合实验室，合肥230032只作为对照组，尾静脉

8、注射无热源