细胞生物学实验课件ppt-PowerPointPres.ppt

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1、细胞生物学实验主讲人:康美玲单位:枣庄学院生命科学系实验一血涂片的制备及细胞大小的测量一、实验目的1.掌握血涂片的制备方法；2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态；3.掌握显微测微尺的使用方法。二、实验原理涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。三、实验用品1.器材:医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片、双凹片（推片）。2.试剂:Wright’s染液：Wright’s色素粉末0.1g，溶于60ml甲

2、醇。四、方法与步骤一.血涂片的制备与血细胞的观察二.显微测微尺的使用采血前用70％酒精棉球消毒人的指腹采血由于第一滴血中含单核白细胞较多，因此弃去第一滴血。推片：挤出第二滴血置于载玻片的右侧再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。30~45°两玻片的角度以30~45°为宜，轻轻将双凹片向前匀速推进，即涂成血液薄膜。染色待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴Wright’s染液盖满血膜为止，染色3min。然后滴加等量蒸馏水，使其与染液均匀混合，静置5min。用蒸

3、馏水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。结果显示淋巴细胞单核细胞嗜中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞显微测微尺的使用显微测微尺是用来测量在显微镜下所观察到的物体的长度、面积的工具，包括镜台测微尺、目镜测微尺两部分。在使用的过程中，镜台测微尺起标定作用，利用它可以确定目镜测微尺旋钮上每小格代表的实际长度。目镜测微尺标定完成后，即可用于细胞样品的测量。每个大格又可分为10个小格，每小格的实际长度为0.01mm总长0.1mm镜台测微尺总长1mm共分为10格目镜测微尺可以通过旋转旋钮移动目镜测微尺中交叉线的位置使用方法1.取下目

4、镜,将目镜测微尺的刻度面向下放入目镜中,旋上透镜；2.将镜台测微尺盖片面朝上放在载物台上,用低倍镜观察,调节焦距看清镜台测微尺的刻度；3.移动镜台测微尺,同时转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近,并将两尺的“0”点刻度线或某刻度线对齐.然后从左向右查看两尺刻度线另一重合处,记录重合线间目镜测微尺与镜台测微尺的格数.按下式计算目镜测微尺每格等于多少微米。目镜测微尺的标定n×aX=MX:目镜测微尺每格的实际长度a:镜台测微尺每格的实际长度n:镜台测微尺的刻度数。M:目镜测微尺的刻度数。4.移去镜台测微尺，换血涂

5、片，目镜测微尺测量细胞所占小格数X目镜测微尺每小格代表的实际长度=被测细胞的实际长度。实验作业1.绘制各种不同类型的血细胞,并说明它们的主要作用？2.任选20个红细胞，测量其直径，并计算出平均值.实验二细胞凝集反应一、实验目的：1.学习制备土豆凝集素2.掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝聚的原理。3.观察凝集的现象CompanyLogo二、实验原理①细胞质膜外表面的一层黏性多糖物质构成的细胞全委会被在细胞间的联系和识别、细胞的生长分化、免疫反应及肿瘤发生等过程中发挥着重要作用。　②动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的

6、糖链伸向膜表面，它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的必要组分。③凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。　　④凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。三、实验仪器显微镜、粗天平、载玻片、滴管、离心管、离心机等.CompanyLogo土豆块茎四、实验材料鸡血细胞CompanyLogo五、实验内容与实施过程1.凝集素粗提液制备（50分钟）：用天平称取去皮

7、的土豆块茎2g+10mlPBS缓冲液，浸泡2h→粗提液中含有可溶性土豆凝集素。2.鸡红细胞悬液制备（35分钟）：以无菌方法抽取鸡血注射器中抽取3.8%柠檬酸钠1ml抽取鸡静脉血液2ml，用生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞液。实验内容与实施过程3.细胞凝集反应现象的观察与讨论（50分钟）：用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。本实验过程很简单，只需要将植物凝集素与红细胞混合后用

8、低倍显微镜观察现象即可。具体如下：实验组凝集素1滴红细胞悬液1滴对照组PBS液1滴红细胞悬液1滴实验内容与实施过程4、实验小结（15分钟）：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。共150分钟。实验作业1.细胞间凝集的原理是什么？2.简图表示血细胞凝集原理.实验总结1.为什么对照组有PB