《细胞生物学实验》PPT课件

《《细胞生物学实验》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、细胞生物学实验吕梁高等专科学校生命科学系生物实验教学中心2009.06实验一细胞凝集反应一、实验目的：1.学习制备土豆凝集素2.掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝聚的原理。3.观察凝集的现象CompanyLogo二、实验原理①细胞质膜外表面的一层黏性多糖物质构成的细胞全委会被在细胞间的联系和识别、细胞的生长分化、免疫反应及肿瘤发生等过程中发挥着重要作用。　②动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜表面，它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的必要组分。③凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一性结合

2、的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。　　④凝集素与糖分子结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体的分布有关。三、实验仪器显微镜、粗天平、载玻片、滴管、离心管、离心机等.CompanyLogo土豆块茎四、实验材料鸡血细胞CompanyLogo五、实验内容与实施过程1.凝集素粗提液制备（50分钟）：用天平称取去皮的土豆块茎2g+10mlPBS缓冲液，浸泡2h→粗提液中含有可溶性土豆凝集素。2.鸡红细胞悬液制备（35分钟）：以

3、无菌方法抽取鸡血注射器中抽取3.8%柠檬酸钠1ml抽取鸡静脉血液2ml，用生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞液。实验内容与实施过程3.细胞凝集反应现象的观察与讨论（50分钟）：用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。本实验过程很简单，只需要将植物凝集素与红细胞混合后用低倍显微镜观察现象即可。具体如下：实验组凝集素1滴红细胞悬液1滴对照组PBS液1滴红细胞悬液1滴实验内容与

4、实施过程4、实验小结（15分钟）：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。共150分钟。实验作业1.细胞间凝集的原理是什么？2.简图表示血细胞凝集原理实验总结1.为什么对照组有PBS液作对照呢？没什么巧，因为凝集素中本身含PBS缓冲液，当含本身凝集素是不含PBS的，只是因为本实验中凝集素的提取时用到了PBS.实验总结2.那么红细胞悬液是怎么制备的呢？其实也不难，无菌抽取动物静脉血液，当然血液抽出来后肯定要先加抗凝剂了，然后再

5、加生理盐水。那么怎么从血液中将红细胞分离出来呢？想想，血液中有血清、红细胞、白细胞和血小板，按道理来讲红细胞应该最重吧(有待查证)，用离心机在2000r/min下离心5min，去掉上清液，得到的应该就是红细胞了，再加适量生理盐水洗涤几次后，加一定量是(按压积红细胞体积算)生理盐水即可配成相应浓度的红细胞悬液了。备注凝集素是一类含糖、并能与糖专一结合的蛋白质,被认为与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。实验二细胞膜的渗透性一、实验目的：了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。二、

6、实验原理细胞膜为一种半透膜，对物质的通透具有选择性。当红细胞放入低渗溶液中时，细胞吸水膨胀而发生溶血。当红细胞放入含不同溶质的等渗溶液中时，由于细胞膜对不同溶质的透性不同，细胞发生溶血的时间也会不同，故发生溶血现象时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。三、实验仪器离心机移液枪试管架试管鸡血四、实验材料鸡血细胞五、实验内容与实施过程1.鸡血细胞悬液的制备：一份鸡血+10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的鸡血。2.低渗溶液：一支试管中，加入10ml蒸馏水+1ml稀释的鸡血

7、，观察溶液颜色的变化？实验内容与实施过程3.鸡红细胞的渗透性观察：在10种等渗溶液中观察细胞溶血现象及时间。实验内容与实施过程4、实验小结（15分钟）：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。实验作业将观察到的现象列入下表，对实验结果进行比较和分析。实验作业试管编号是否溶血时间结果分析1.10ml氯化钠+1ml稀释羊血2.10ml氯化铵+1ml稀释羊血3.10ml醋酸铵+1ml稀释羊血4.10ml硝酸钠+1ml稀释羊血5.1

8、0ml草酸铵+1ml稀释羊血6.10ml硫酸钠+1ml稀释羊血7.10ml葡萄糖+1ml稀释羊血8.10ml甘油+1ml稀释羊血9.10ml乙醇+1ml稀释羊血10.10ml丙酮+1ml稀释羊血实验总结溶血时间及现象的观察比较困难，可采用离心辅助的方法来判别鸡血在哪些等渗液中最易溶血，哪些较慢，做一些定性的分析。经过离心之后，若上清液无色，证明在这个时间段血细胞没发生溶血，若上清液略红，证明有溶血发生。当然这个方