纳豆激酶液态发酵条件的研究-论文.pdf

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1、第l0卷第4期生物加工过程Vo1．10No．42012年7月ChineseJournalofBioprocessEngineeringJu1．2012doi：10．3969／j．issn．1672—3678．2012+04．006纳豆激酶液态发酵条件的研究熊强，张菲菲，杨青丽(南京工业大学生物与制药工程学院，南京210009)摘要：考察纳豆杆菌在7．5L发酵罐中分批发酵产纳豆激酶的条件，纳豆激酶酶活采用四肽底物测定。结果表明：纳豆杆菌生长和产酶的适宜条件不一致。发酵过程中发酵罐搅拌转速控制为500r／min不变，0～12h时控制pH为8．0、温度为37；12～3

2、6h调整pH为7．0、温度为30℃；16h时补加外源C源，连续发酵36h。该过程中发酵液中比酶活最高达到3232U／mL，与摇瓶发酵相比，比酶活提高了58％。关键词：液体发酵；纳豆激酶；分阶段调控中图分类号：TQ920．1文献标志码：A文章编号：1672—3678(2012)04—0026—04StudyonliquidfermentationofnattokinaseXIONGQiang，ZHANGFeifei，YANGQingli(CollegeofBiotechnologyandPhal~naceutiealEngineering，NanjingUnive

3、rsityofTechnology，Nanjing210009，China)Abstract：Inordertoinvestigatetheeffectsoffermentationconditionsofnattokinaselinei．e．agitationspeed，temperature，pH，fermentationtime，feedingandphasecontro1)，thefermentationwasca~iedoutina7．5Lfermenter．TheenzymeactivityofNKwasdeterminedbythetetra—pe

4、ptide(Suc—ALIa—Ala—Pro—Phe—pNA)assubstrate．TheresultsshowedthattheappropriateconditionsofBacillussubtillisnattogrowthandenzymeproductionwereinconsistent．Theagitationspeedwascontrolledat500r／mininthefermentationprocess，andthreestageswerestudied，i．e．pH8．0，temperature37at0—12h，pH7．0，tem

5、perature30℃at12—36h，addingcarbonsourceafter16h，thenacontinuousfermentationfor36h．Theenzymefibrinolyticactivityreached3232U／mL，whichwasincreasedby58％incontrastwiththatofliquidfermentationinflask．Keywords：liquidfermentation；nattokinase；phasecontrol纳豆激酶(nattokinase，简称NK)是日本传统食药物。品纳豆(nat

6、to)在发酵过程中由纳豆芽胞杆菌(Ba—现阶段对纳豆激酶的研究大部分限于摇瓶试cillusnatto)产生的一种具有纤溶活性的丝氨酸蛋白验，在发酵罐中进行大规模培养的报道较少¨2I。J。酶¨J。该酶能显著地溶解体内外血栓，明显缩短交由于摇瓶发酵与大规模工业化发酵在发酵条件、调联状态纤维蛋白的溶解时间，并能激活体内血管内控手段等方面有诸多差异，往往存在着“放大效皮细胞产生纤维蛋白溶酶原激活剂，从而增加内源应”。所以，在摇瓶发酵的基础上有必要对发酵性纤溶酶的量与作用，是一种极具潜力的新型溶栓罐的发酵条件做进一步的研究。收稿日期：2011—10—11基金项目：汀苏省科

7、技厅科技支撑计划资助项目(BE2010727)作者简介：熊强(197O一)，男，江苏南京人，副教授，研究方向：微生物与发酵工程，E-mail：xiongqiang@njut．edu．C13第4期熊强等：纳豆激酶液态发酵条件的研究27笔者在摇瓶发酵基础上，从搅拌转速、温度、1．4．3生物量的测定方法pH、补料的添加及发酵时间等方面对菌株进行发酵每次取样时，取1mL发酵液适当稀释，以接种放大实验，并采用四肽底物法进行测定，以此提高前培养基为空白，用分光光度计测定波长660nm处纳豆激酶液态发酵的水平，以期为工业化生产奠定的吸光值(OD)。一定的基础。2结果与讨论1材

8、料与方法2．1搅拌速率对