模式小鼠总DNA三种提取方法比较-论文.pdf

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1、2014年7月中国比较医学杂志July，2014第24卷第7期CHINESEJOURNALOFC0MPARATIVEMEDICINEVo1．24No．7模式小鼠总DNA三种提取方法比较刘廷苏，左琴，周舒雅，王辰飞，贺争鸣，李保文，范昌发(中国食品药品检定研究院，国家啮齿类实验动物种子中心，北京100050)【摘要】目的建立简便、快捷、经济的模式小鼠总DNA提取方法，以快速鉴定大批量模式小鼠基因型。方法采用苯酚抽提法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法提取同种模式小鼠总DNA，对比DNA纯度、得率、耗费时间，并比较基因型鉴定结果。结果苯酚抽提法得率最高，异丙醇沉淀法最低；而纯度则按照苯酚抽提

2、法、异丙醇沉淀法、鼠耳煮沸法顺序递减；在耗时上鼠耳煮沸法最短。三种方法提取的DNA均可做模版用于基因型鉴定。结论鼠耳煮沸法操作简单、成本最低，快速、基因型鉴定结果可靠，可用于规模化的基因型鉴定实验中。【关键词】总DNA提取方法；基因型鉴定；PCR反应；模式小鼠【中图分类号】R332【文献标识码】A【文章编号】1671．7856(2014)07—0045—06doi：10．3969．j．issn．1671．7856．2014．007．009ComparisonofthreemethodsfortotalDNAextractionfrommousemodelsLIUSu—SU，ZUO

3、Qin，ZHOUShu·ya，WANGChen·fei，HEZheng—ming，LIBao—wen，FANChang—fa(LaboratoryAnimalResourceCenter，NationalInstituteofFoodandDrugControl，Beijing100050，China)【Abstract】0bjectiveToestablishasimple，fastandeconomictotalDNAextractionmethodtoservetherapididentificationofmodelmousegenotypeinlargenumberof

4、mice．MethodsThreemethods，i．e．phenolextraction，isopropylalcoholprecipitationandmouseearboilingmethodswereusedtoextractthetotalDNAfromtenC57一rasmodelmice．ThepurityandyieldofDNAobtainedbythethreemethodswerecompared，andpolymerasechainreaction(PCR)assaywasusedtocomparetheefficacyofthethreeextracti

5、onmethods．ResultsAmongthethreemethods，phenolextractionwasthebestandisopropylalcoholprecipitationwasthepoorestinDNAyield．IntermsofDNApurity，thephenolextractionwasthebestandthemouseearboilingmethodwasthepoorest．AllthethreemethodscouldbeusedtoextractthetotalDNAfrommiceservingastemplateofPCRreact

6、ionforthemousegenotypeidentification．Thetimeconsumptionofthreemethodsare12．5hr，13hrand0．18hr．Mouseearboilingmethodwassignificantlylowerthanthatoftheothertwomethods(P<0．01)，．TheobtainedtotalDNAcanbestoredatconventional一20~Cfor7daysand30dayslaterstillcanbeusedasatemplateforPCRreaction．Conclusio

7、nsAmongthethreemethodsstudied，themouseearboilingmethodissimpleandwiththelowestcost，80itisfeasiblefortotalDNAextractioninscaledgenotypingexperiments．【Keywords】TotalDNAextraction；Genotypeidentification；PCRreaction；Modelmice随着基因工程技术的不断发展和完善，基因工域