三种快速提取植物DNA改良方法的比较

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1、遗传HEREDITAS(Beijing)12(2)10-121990三种快速提取植物DNA改良方法的比较陈璋朱秀英卢勤（福建农学院作物遗传育种所，福州）DNA是生物遗传信息的载体，快速提取高分子量、纯净的DNA是进行核营酸序列测定、基因文库构建和遗传转化等研究的重要步骤。研究以水稻、小麦、大麦、大豆、豌豆和紫云英等为材料，比较了三种改良法提取植物DNA的效果。结果表明，三种改良后的方法不仅保留了原法的许多优点，而且方法简单，不经cscl：密度梯度离心能较干净地去除蛋白质及RNA，获得较纯净的、大分子的双链DNA,在不同程度上满足了各种植物提取DNA的需要。关键词：植

2、物，脱氧核糖核酸，提取，方法与动物细胞相比，植物细胞除了有细咆壁（三）方法与分析外，还含有大量的多糖、脂质、色素和酚类物质，1．提取方法为DNA的提取与纯化带来了很大困难。目改良饱和酚法根据傅焕延等〔73的方法修前常用的提取方法是在应用多种有机溶剂振荡改。提取液加裂解缓冲液水浴保温悬浮处理1提取的基础上，加之以CSC12密度梯度超速离小时后，分别以饱和酚、饱和酚和氯仿异戊醇、心[8,19,11]，这种方法虽然效果较好，但难以为一氯仿异戊醇重复抽提2次，加人RNase，于370C般实验室所采用。水浴中保温30分钟。提取过程离心均为4-在前人研究的基础上，我们对常用的D

3、NA10℃下10000转／分、1，分钟。提取法加以改进，并进行比较研究。改进后改良氯仿异戊醇法参照陈永强〔们和米景的提取法能在不同程度上满足各种植物提取九等127方法改进。以95多冷乙醇沉淀，低温下DNA的需要，获得较纯净的、大分子的双链高速离心获得粗DNA溶液后，经5mo1NaCIO4,DNA.22%SDS和24:1(V/V)氯仿异戍醇混合溶剂高速离心重复抽提2次，再加人RNase去除材料与方法RNA，即可获得纯化的DNA溶液。（一）材料改良胰蛋白酶法据白永延C1]介绍的方法将水稻（中花9号、金梗1号和紫色稻）、改进。在“多冷乙醇沉淀离心后获得的粗小麦（苏麦3号、

4、60015)、大麦（早熟3号、DNA溶液，加人2mo1NaC12195外冷乙醇、508018)、大豆（古田豆）、豌豆和紫云英等植物RNase低温高速离心与水浴保温相结合，以获的种子，用0.1务HgC12消毒后，在适宜条件下得纯化的DNA溶液。浸种、催芽、暗培养，待黄化苗长到一定高度时，提取前，试验材料均需置一18℃下冷处理置一18℃冰室冷冻1-3天，备用。不少于2天。研磨时，应加人少量石英砂，以达（二）试剂RNase(MerckCo.，WestGermany）和胰ChenZhangetal.:ComparisonofThreeImpr-ovedMethodsforR

5、apidExtractionofPlant蛋白酶(S咭maCo.,USA)，其余均为国产分DIVA.析纯试剂。本文于1988年8月17日收到。到快速破壁的目的。2．光密度值与光谱扫描光密度值与光谱扫描均在Shimadzuuv-120紫外分光光度计上进行。3．纯度测定DNA回收率（浓度）、RNA含量和蛋白质含量分别采用二苯胺法【31苔黑法’，，和双缩豚法1510另外，测定了各种方法获得的DNA的热变性值，以初步了解双链DNA的大小。结果与讨论图1DNA溶液紫外光谱扫描图从图1中可以看出，不论是氯仿异戊醇法1．改良饱和酚法（小麦）；2.饱和酚法（／卜麦）；提取的水稻（中

6、花8号）DNA，还是饱和酚法提3.氯仿异戊醇法（水稻）；4．改良氯仿异戊醇法（水稻）；，．改良0x-自f#F1-(豌豆）；6.胰蛋白酶法（豌豆）。取的小麦（60015)DNA或胰蛋白酶法提取的豌豆DNA，其光谱扫描结果均表明，DNA的胰蛋白酶法则不适用于提取水稻；大豆则与之低谷为230nm，高峰为258-260nm，符合天相反。然DNA的特性。而比较改良法与原法的从以上可知，改良法不仅保留了原法的许A258/A230、A258/A280、热变性值、RNA与多优点，而且可不经CsCl：密度梯度离心能较蛋白质含量及DNA浓度等（表1)，说明改良干净地去除蛋白质及RNA，

7、获得较纯净的、具法所得的DNA比原法提取的DNA不仅回天然双链结构、大分子的DNA，在不同程度上收率高，而且具天然双链结构，符合遗传转化和满足了提取各种植物DNA的需要，不需特殊植物分子育种等研究的要求，是一种简便易行仪器，可为一般实验室接受。研究还表明，不同的方法。提取法适合于不同种类的植物，改良饱和酚法比较不同提取法所获的DNA的性质（表适合于提取小麦等植物的DNA，改良氯仿异2）可以明显看出，对同一种植物不同方法间存·戊醇法则适用于水稻、大麦、紫云英等植物，而在显著差异，以·水稻中花8号为例，改良氯仿异大豆、豌豆等豆类作物采用改良胰蛋白酶法可戊醇法可获得纯