利用种子萌发法快速检测抗草铵膦转基因大豆-论文.pdf

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1、第31卷第4期大豆科学Vol_3lNo．42012年8月S0YBEANSCIENCEAug．2012利用种子萌发法快速检测抗草铵膦转基因大豆常晶，孟凡立，李永光，李文滨(东北农业大学大豆研究所，教育部大豆生物学教育部重点实验室，农业部东北大豆生物学与遗传育种重点实验室，黑龙江哈尔滨150030)摘要：转基因后代植株遗传存在不稳定性，能够快速有效地筛选后代阳性植株成为转基因研究工作的重点。通过在培养基中添加不同浓度的草铵膦进行种子萌发试验，结果普通受体大豆品种东农5O在大于5．0mg·L草铵膦筛选压力下，种子萌发率显著降低，植株根系生长受到抑制，基本不能完成正常的生活史；携带b

2、ar基因的Southern拷贝T：代转基因大豆种子在添加5．0mg·L草铵膦的MS培养基中34．7％能正常萌发生长，利用CaMV35S和bar2对引物对5．0mg·L草铵膦筛选得到的转基因植株进行检测，能扩增出正确的条带，结果均为阳性。研究表明应用种子萌发法能够快速检测草铵膦转基因大豆。关键词：转基因大豆；草铵膦抗性；萌发法；分子检测中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：10009841(2012)04-0534-04RapidDetectingGlufosinate—TolerantTransgenicSoybeanviaSeedGerminationMethod

3、CHANGJing，MENGFan—li，LIYong—guang，LIWen—bin(SoybeanResearchInstitute，NortheastAgriculturalUniversity，ChineseEducationMinistry’sKeyLaboratoryofSoybeanBiology，AculturalMinistry’SNortheastArealKeyLaboratoryofSoybeanBiologyandGeneticBreeding，Harbin150030，Heilongjiang，China)Abstract：Weneedtochoo

4、searepaidandeffectivemethodtosolvetheproblemthattransgenicoffspringsaregeneticinsta—ble．Inthisstudy，theseedsofDongnong50weresowedinMSmediumcontaineddifferentconcentrationsofglufosinate．Under5．0mgI一glufosinate．th。germinationrateandgrowthofnon—transgenierecipientDongnong50wereseriouslyinhibit

5、edandcouldn’tcompletelifecycle，while34．7％ofthetransgenicsoybeancouldnotonlygerminateandgrowup，butalsocouldam—plifytherightspecificsegmentusingCAM1／35Sandbarprimers．Wecandeducethatthegerminationmethodisarapidandef-fectivemethodtodetectglufosinate—toleranttransgenicsoybean．Keywords：Transgenic

6、soybean；Glufosinatetolerance；Germinationmethod；Molecularassay随着转基因技术的进步，转化体系已经逐步得高剖。草铵膦(Glufosinate)，又名草丁膦，属磷酸到改进和优化。培育出遗传稳定的转基因阳性植类除草剂J。草铵膦主要在植物体内强烈的抑制株、达到培育优良性状新品种成为转基因育种研究谷氨酰合成酶(GlutamineSynthetase，GS)的活性，导的重点。转基因株系后代采用单籽传种法，采用外致铵离子积累从而抑制植物光合作用，最终引起植源基因鉴定及遗传性分析等方法可鉴定外源基因物细胞氨中毒死亡。草铵膦对抗性植物

7、的胁迫是否成功转育到转基因植物中并稳定遗传表达。是一种适应过程，转基因植株经过损伤期、修复期、检测外源基因方法主要通过检测筛选标记基基本恢复等过程表现出对草铵膦的抗性。在植物因或报告基因的存在以及外源目的基因PCR扩增、遗传转化中草铵膦主要作为一种筛选剂，广泛应用Southern杂交、原位杂交等。检测筛选标记基因或于农杆菌介导目的基因转化植株前期的外植体筛报告基因的存在状态，是一种方便、快捷的外源基选过程中。因检测方法。利用PCR、Southern杂交、Northern在大豆转基因阳性后代的筛选中，适合