利用两种遗传转化方法获得抗草甘膦转基因大豆的研究

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1、戀尖蓉，矣津－ＭＴＩＡＮＪＩＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ中国第所现代大学ＦＯＵＮＤＥＤ，Ｎ１８９５．＇ｔ？．＇＇．心。－Ｈ懼＾喻Ｍ请：ｓｍ歷‘．Ｍ伊．喝．ｓ麵‘．Ｊ＾Ｉ古ｙｙ屬—呼主＿色与聲－：識ｉ＃学科专业作者姓名：荣非或指导測巧；王罢教授＾＇＊＜如１■＾Ｔ．當巧成Ｗ咬啊１＾；Ｉ天津大学研究生Ａ＾＇＾２０１５年５月＾ｙｍｕｐ利用两种遗传转化方法获得抗草甘膦转基因大豆的研究Twotransgenicmethodstoobtaingeneticallymodifiedglyp

2、hosate-resistantsoybean学科专业：遗传学研究生：荣非指导教师：王罡教授天津大学环境科学与工程学院二零一五年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加标法和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证一书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。。学位论文作者签名；签字日期：２。传年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。

3、特授权天津大学可！义＾隐学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编Ｗ供查阅和借调。同意学校向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘。■．（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）－‘、学位论文作者签名：导师签名：签字日期。〇０’；公於年口（月日签字日期：皆Ｓ年（月日／Ｉ１中文摘要大豆起源于中国，近年来却由于各种原因国内大豆在国际市场的竞争力不断下降。导致我国大豆产业陷入困境的一个关键因素就是草害，在我国约有80%的大豆田受到不同程度的草害，即便是受到中等程度草害的大豆田也占全国大豆田总面积的一半以上

4、，每年我国因草害而损失的大豆占到全国大豆总产量的15%。近些年随着基因工程技术的不断发展，一些具有更强除草剂抗性的基因逐渐被发掘出来，抗除草剂转基因大豆的出现为解决大豆田草害问题提供了新的转机。本试验首先研究了绥农22、绥育06-8790、黑农61、合丰25、合丰35五个大豆品种的胚尖再生能力。试验结果表明，大豆胚尖不定芽诱导率在品种间存在差异，其中黑农61胚尖不定芽诱导率最高，达82.85%；绥农22胚尖不定芽诱导率最低，仅为46.64%。大豆各品种的胚尖不定芽芽数也不尽相同，其中绥农22最高，平均芽数为1.67个；其次为黑农61，为1.35个；平均芽数最少的是合丰25，为0.63个。

5、用不定芽诱导率与芽数两个性状综合评价各品种胚尖的再生能力，发现黑农61胚尖再生能力较强。此外，还进行了胚尖在不定芽再生过程中对草甘膦的耐受浓度试验，结果表明在不定芽伸长阶段，绥农22、合丰25胚尖草甘膦适宜的筛选压为7.5mg·L-1，合丰35、绥育06-8790胚尖草甘膦适宜筛选压为10.0mg·L-1，黑农61胚尖草甘膦适宜筛选压为15.0mg·L-1。本试验利用农杆菌介导法对大豆5个品种胚尖进行了遗传转化，T0代PCR检测到12株具有目的基因条带的转基因大豆植株。本试验重点用“微创刷”法转化大豆五个品种5000粒种子，获得46200粒T0代种子，对T1代大豆植株进行草甘膦喷施筛选，

6、存活并且PCR检测具有目的基因条带的T1代有102株。对T2代绥农22转基因大豆与野生型绥农22大豆叶片在不同浓度草甘膦作用下的一些相关生理指标进行了测定，发现转基因绥农22植株比野生型绥农22植株表现出对草甘膦有更强的抗性，表明EPSPS目的基因已经转入大豆植株中，并提高了对草甘膦的抗性。关键词：大豆；农杆菌介导；“微创刷”；转基因；EPSPS基因ABSTRACTSoybeanoriginatesfromChina,andduetovariousreasons,thedomesticsoybeanproductioniscomparativelydecreasing.Animporta

7、ntfactoraffectingtheproductionofsoybeaninChinaisweeds.Above80%soybeanfieldswereaffectedbyweeds,and15%ofsoybeanproductionwasdecreasedduetotheweeds’affectioninChina.Withthedevelopmentofgeneticengineeringtechnology,morean