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1、大鼠胚胎小脑捉取液对体外培养小脑神经细胞的作用山西医药杂志2000年第5期第29卷实验研究作者：章培军吕捷吕永利单位：章培军(大同医学高等专科学校037008)；带(首都医科大学北京市神经科学研究所);吕永利(中国医科大学)关键词：靶源性神经营养因子；小脑提取液；胎龄；细胞培养；小脑【摘要】日的观察不同胎龄大鼠小脑提取液(cerebellumextracts,CE)X'j体外培养小脑神经细胞的影响。方法制备不同蛋白浓度的14、16、18、20d胎鼠(E14、E16、E18、E20)及新生]d鼠(Pl)CE,加入原代培养的E18胎鼠小脑神经细胞中,24h后以微量快速自动比色法检
2、测细胞活性。结果实验纽各胎龄CE均能促进培养小脑神经元的存活，并有蛋白浓度依赖关系，各胎龄都有各自不同的最适浓度，E16和E18CE显示了更强的神经营养活性，与对照创及其他实验纽利比差异有极显著性(P<0.001)o结论CE对培养小脑细胞具有高度神经营养活性。EffectofcerebellumextractsfromembryonicratonculturedcerebellarneuronsZhangPeijun,LüJic,LüYongli(DatongMedicalCollege,Datong,037008,China)【Abstract】Obje
3、ctiveTheeffectsofcerebellumextracts(CE)fromdifferentembryonicagesonculturedratcerebellarneuronswerestudied.MethodCEfrom14d,16d,18d,20dembryonicrats(E14〜20)andPlnewbornratweremadeintodifferentconcentrationsonprotein,thenwereaddedtoculturedcerebellarneuronsofEl8rats.Theneuronalsurvivalwasdete
4、rniinedbytheautocolorimetricassay.ResultsThedatashowedthatCEofallexperimentalagescouldpromotethesurvivalofcerebellarneuronsandtherewasaconcentration-dependentrelationonprotein;eachagehaditsrespectiveoptimunproteinconcentration^16andE18CEshowedmoreprominentneurotrophicactivities,makingasigni
5、ficantdifference(P<0.001)cemparedwiththecontrolandotherexperimentalgroups.ConclusionTheratcerebellumextract(CE)hasapowerfultrophotropiceffectontheculturedcerebellarneurons.【Keywords]Target-derivedneurotrophicfactors;Cerebellumextracts;Embryonicage;Cellculture;Cerebellum神经营养因子(neruotrophicfa
6、ctors,NTFs)能维持发育神经元的存活和分化，促进受损伤神经元的修复与再生°受损伤神经元的长期存活及功能恢复还有赖于这些神经元的靶细胞提供的相对特异的靶源性神经营养因子(target-derivedneurotrophicfactors,TNTFs)[1]=Hu己从纽•织提取液中提出多种特异性TNTFs[2,3]0小脑是重要的运动中枢，已发现有多种TNTFs及其受体在表达，但以小脑为靶器官提供的特并TNTFs述未见报道。我们设想，除了非特异性TNTFs以外，小脑神经细胞在胚胎发育中也可能合成分泌某些特异的TNTFs,诱导自身神经元轴突的生长，从而建立特异的神经通路联系。
7、为此，我们制备不同胎龄小脑提取液，观察了它们对培养小脑神经细胞的作用。1材料与方法1.1CE的制备:取相应胎龄(E14、E16、E18、E20)胚鼠及P1新生鼠小脑各20个,按每10mg重加1mLPBS(pH7.0)的比例,制备匀浆,经超声粉碎后,将匀浆液离心,30000r/min,4°C,90min,収上清液，以紫外分光光度法测定蛋白质浓度，以PBS(pH7.0)作相应稀释，得到不同蛋白浓度的CE,经0.22um微孔滤膜滤过除菌，一70°C冻存备用。1.2细胞培养：取出E18小脑皮质，经胰酶消化后，得
