藏绵羊胃溶菌酶基因的克隆、定量分析及其蛋白性质和结构的预测

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1、嚣荔霪·《转《iC8躺}姆0l_藏绵羊胃溶菌酶基因的克隆、定量分析及其蛋白性质和结构的预测朱莲莲，江明锋一，张鹏，骆美蓉’，李建波，任洪辉，王永(1．青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室，西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041：2．国家民委与教育部动物遗传育种重点实验室，四川成都610041)摘要：本实验旨在研究藏绵羊溶茵酶组织基因组成、分布情况和蛋白质结构。~3ERT—PCR~-法克隆测序得到藏绵羊溶茵酶基因核苷酸序列，并对氨基酸的组成和功能活性位点-k~53一谷氨酸和71

2、一天冬氨酸等进行统计；运用生物信息学软件对藏绵羊溶菌酶的等电点、信号肽序列等性质进行分析，并构建系统进化树；运用荧光定量PCR方法对藏绵羊的瘤胃、瓣胃、皱胃、肾脏、气管和肝脏分别进行检测溶菌酶基因的部分组织分布情况及其mRNA的表达水平结果表明：此绵羊溶菌酶基因核苷酸序列为447bp．编码148个氨基酸残基；其mRNA的表达水平在藏绵羊的瘤胃和瓣胃相对较高，与其他4种组织比较差异显著(P

3、26．2文献标识码：A文章编号：0258—7033(2013)23—0012-06溶菌酶，又称胞壁质酶，是一种碱性蛋白，主要键lI_，从而导致细菌裂解而亡。分布在与健康密切水解革兰氏阴性菌细胞壁中的肽聚糖的一1，4糖苷联系的组织细胞中，如骨髓细胞、肾小管、泌乳期乳腺细胞、唾液腺细胞等_3l。蛋清溶菌酶是最早被分离收稿口期：2013-01—22：修回日期：2013—03—26纯化的，随着人们研究的深入和拓展，已经克隆到许资助项M：国家科技支撑计划课题(2012BAD13B06)；四川省科技多种类溶菌酶

4、。迄今发现的溶菌酶类型有几十种，创新产业链示范T程项目(2011NZ0003)；中央高校基本科研业主要分为动物型、植物型、微生物型、噬菌体型和基务费专项资金(11ZYXS25，10NZYZJ01)因工程型5大类型。动物型中包括Chicken型l4j、Goose作者简介：朱莲莲(1984一)，女，江苏泗洪人，硕士型l5l、Invertebrate型、M型和P型【1等。溶菌酶有抗菌保通汛作者AnalysisofTAP1GeneExpressioninSensitiveandResistantWeanli

5、ngPigletstoEscherichiacoliF18WANGJin，ZHUShi—ping，ZHAOQiao—hui’，Z1Chen，WUSheng-long，2BAOWen—bin，。f1．KeyLaboratoryforAnimalGenetics，Breeding，ReproductionandMolecularDesignofJiangsuProvince，CollegeofAnimalScienceandTechnology，YangzhouUniversity，JiangsuYan

6、gzhou225009，China；2．JiangsuEngineeringResearchCentreforMolecularBreedingofBreederPig，JiangsuChangzhou213149，China)Abstract：ThispaperaimedatinvestigatingthedifferentialexpressionofTAPlgenebetweenEscherichiacoliF18一resistantand—sensitivepiglets．andexplor

7、ingthepotentialroleofgeneinE．coliF18resistanceofweanlingpigs．Theexpressionlevelofgenein11tissues．whichwasobtainedfromeightE．coliF18一resistantandeightE．coliF18一sensitiveSutaipigletsof35daysold，wasdetectedbythemethodofReal—timePCR．Theresultshowedthatthee

8、xpressionprofileofTAPlgenewasconsistentbetweensensitiveandresistantpigsandTAP1expressedmuchhigherinintestinaltissues(duodenum，jejunum)，immunetissues(spleen，lymphnode，andthymus)andlung．TheexpressionofTAP1geneinresistantindividualswashigh