肠炎沙门氏菌sef14菌毛体外表达条件研究

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1、第35卷第12期中国预防兽医学报VO1．35．No．122013年12月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineDec．20l3doi：10．3969~．issn．1008—0589．2013．12．06肠炎沙门氏菌SEF14菌毛体外表达条件研究朱春红”，段晓丽”，厚华艳，龚建森，张江英，姚丰华，孟霞，朱国强(1．江苏省家禽科学研究所，江苏扬州225125；2．扬州大学兽医学院，江苏扬州225009)摘要：为筛选肠炎沙门氏茵(s．enteritich's)SEF14菌毛体外表达的最适培养条件，本研究对4种不同培养条件下S．enteritidi

2、sSEF14菌毛的体外表达情况进行了比较研究，并通过RT．PCR、透射电镜与免疫电镜观察和SDS．PAGE等方法进行验证。研究表明，其中以TSB肉汤25℃震荡培养24h后转接20℃继续震荡培养24h，最后转接粘附因子抗原培养基(CFA)(pH6．0)于37℃静置培养50h～60h的SEF14菌毛表达量最高。RT—PCR结果显示在该培养条件下SEF14菌毛主要亚单位蛋白编码基因sefAmRNA表达水平最高，在透射电镜和免疫电镜下均可观察到丰富的SEF14菌毛。SDS．PAGE结果显示，所抽提的菌毛蛋白大小为14．3l(u，与相关报道一致，而且等量菌泥的抽提量最大。关键词：肠炎沙门氏菌；SEF

3、14菌毛；表达条件；RT—PCR；电镜观察；匀浆抽提中图分类号：$852．61文献标识码：A文章编号：1008．0589(2013)12．0976．04OptimalconditionforexpressionionSEF14fimbriaeofS．enteritidisinvitroZHUChun—hong十DUANXiao—li十HOUHua—yan，GONGJian—sen，ZHANGJiang—ying，，，YAOFeng—hua，MENGXia2，ZHUGuo—qiang2(1．JiangsuInstituteofPoultryScience，Yangzhou225125，Chi

4、na；2．CollegeofVeterinaryMedicine，YangzhouUniversity，Yangzhou225009，China)Abstract：FimbriaeareimportantdeterminantofimmunogenicityofSalmonella．TooptimizedtheconditionforexpressingSEF14fimbriaeofSalmonellaserovaysenteriditisintro，fourdifferentbacteriacultureprotocolswereusedandtheexpressionofSEF14fi

5、mbriaeexaminedbyRT—PCR，TEMassayandSDS．PAGE．TheresultsshowedthatSEF14fimbriaeofS．enteHtidisexpressedmoresuficientlybydirectinoculationofTSBmediumfromstockcultures，followedbyincubationat25℃for24hoursandtransfertofleshTSBmediumwithaproportionof1：1O0andculturedforafurther24hoursat20℃．finally．thecultur

6、ewasgrowninstaticcolonizationfactorantigenbroth(CFA，pH6．0)withaproportionof1：50at37℃f0r50to60hours．RT—PCRassayshowedthatsefAmRNAexpressionlevelinthisconditionwashigherthanothers，andtheSEF14fimbriaewareshowedinthesurfaceofS．enteritidisbyTEMandimmunoelectronmicroscopyassay．Inaddition，SEF14fimbriaepr

7、oteinwasabout14．3kudetectedbySDS—PAGE．Keywords：Salmonellaserovarsenteriditis；SEF14fimbriae；expressionconditions；RT—PCR；TEM；homogenateextraction*Correspondingauthor；十Equalcontributors收稿日期：2013-01—08基金项目：国家自然科学基金(3